岷当归有效成分对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化的影响

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王晓萍1,周明旺1,康开彪2,颜春鲁3,李妍怡 1

1.甘肃省中医院,甘肃 兰州 730050;2.甘肃省中医药研究院,甘肃 兰州 730050;3.甘肃中医药大学,甘肃 兰州 730000摘要:目的 观察岷当归3种有效成分(当归挥发油、当归多糖、阿魏酸)对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化(AS)的影响,探讨其作用机制。方法 日本大耳白兔48只,随机分为正常组、模型组、当归挥发油组、当归多糖组、阿魏酸组和叶酸维生素组,每组8只。采用DL-蛋氨酸皮下注射法建立高同型半胱氨酸血症兔模型,造模8 周后各给药组给予相应药物灌胃,12 周后检测各组兔血清同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,观察兔腹主动脉病理变化。结果 模型组较正常组 Hcy 水平明显升高(P<0.05);当归挥发油组、阿魏酸组、叶酸维生素组 Hcy 水平较模型组明显降低(P<0.05);当归挥发油组、阿魏酸组 TC、TG、LDL-C 水平较模型组

明显降低(P<0.05)。腹主动脉组织学检查显示,模型组AS征象明显,叶酸维生素组、当归挥发油组、阿魏酸组病变程度较模型组减轻。结论 岷当归有效成分当归挥发油和阿魏酸能减轻模型兔血管内皮的损伤,对高同型半胱氨酸血症致兔AS病变有防治作用。关键词:高同型半胱氨酸血症;动脉粥样硬化;当归挥发油;当归多糖;阿魏酸;兔

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2018.02.012

中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2018)02-0051-04

Effects of the Effective Constituents of Min Angelicae Sinensis Radix on Hyperhomocysteinemia Induced Rabbit Atherosclerotic Lesions

WANG Xiao-ping1, ZHOU Ming-wang1, KANG Kai-biao2, YAN Chun-lu3, LI Yan-yi1

1. Gansu Provincial Hospital of Chinese Medicine, Lanzhou 730050, China; 2. Gansu Provincial Academy of Chinese

Medicine, Lanzhou 730050, China; 3. Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China Abstract: Objective To observe the effects of three effective constituents of Min Angelicae Sinensis Radix on hyperhomocysteinemia (HHcy) induced rabbit atherosclerotic lesions (AS). Methods Forty eight Japanese big ear rabbits were randomly divided into normal group, model group, Angelicae Sinensis Radix volatile oil group, Angelicae Sinensis Radix polysaccharide group, ferulic acid group and folic acid group, with 8 rabbits in each group. The HHcy rabbit model induced AS was duplicated by injected DL-methionine. After 8 weeks, each medication group was given relevant medicine for gavage. After 12 weeks, Hcy, TC, TG, HDL-C and LDL-C level in serum were detected, and abdominal aorta vascular ultrasound were observed. Results The model group was higher than the normal group in the level of Hcy (P<0.05). Compared with the model group, the levels of Hcy in Angelicae Sinensis Radix volatileoil group, the ferulic acid group and the folic acid group decreased (P<0.05). Compared with the model group, the levels of TC, TG and LDL-C in AngelicaeSinensis Radix volatile oil group, ferulic acid group and folic acid group decreased (P<0.05). Abdominal aorta ultrasonography showed that the degree of AS was significantly attenuated in folic acid group, Angelicae Sinensis Radix volatile oil group and ferulic acid group. Conclusion Angelicae Sinensis Radix volatile oil and ferulic acid in Min Angelicae Sinensis Radix can reduce the harm to endothelium and can prevent and treat HHcy caused by rabbit AS.

Keywords: hyperhomocysteinemia; atherosclerosis; Angelicae Sinensis Radix volatile oil; Angelicae Sinensis Radix polysaccharide; ferulic acid; rabbits 基金项目:甘肃省自然科学研究基金计划项目(1208RJZA187);甘肃省高等学校科研项目(2013A-086)

当归(Angelicae Sinensis Radix)系伞形科植物当归的干燥根,性甘、辛、温,主要归肝、心、脾经,具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。前期研究表明,以重用岷当归配伍组方的系列制剂如中风膏、补脑膏、佛手瓜蒌胶囊等,在治疗心脑血管疾病

均取得显著疗效[1-3],大剂量岷当归的使用是这一系列药品最重要的用药特色,且其用量达到了药典规定的 6 倍(90 g),但无明显毒副作用与不良反应[4]。同时,中风膏可明显降低动脉粥样硬化(AS)家兔模型血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,升高一氧化氮水平,达到保护血管内皮细胞、抗 AS 的作用[5]。本实验采用皮下注射 DL-蛋氨酸诱导高同型半胱氨酸血症致兔 AS模型,观察岷当归3个主要有效成分(当归挥发油、当归多糖、阿魏酸)对高同型半胱氨酸血症致兔 AS的影响,探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物成年健康普通级日本大耳白兔48只,雌雄各半,

4月龄,体质量 2.0~2.5 kg,中国农业科学院兰州兽医研究所,动物合格证号 SCXK(甘)2010-0001。饲养于温度 18~24 ℃、明暗交替12 h/12 h清洁环境。

1.2 药物岷当归饮片购自岷县中药材有限公司。岷当归 3个有效成分(当归挥发油、当归多糖、阿魏酸)的提取均在实验室制备。当归挥发油:超临界CO2萃取法提取,萃取温度40 ℃,萃取压力,35 MPa,CO2消耗量 60 mL,冰水浴收集产品,出油率为1.45%。当归多糖:水煮醇沉法分离提取,石油醚、乙醚除去当

归中脂溶性杂质,85%乙醇提取除去所含单糖、低聚糖及苷类等干扰性成分后,再用水提醇沉法制得当归粗多糖,提取率为8.77%。阿魏酸:超临界 CO2萃取法提取,药材粉碎为粒度 0.30~0.85 ram,夹带剂(乙醇)浓度8%,萃取压力 35 MPa,萃取温度 60~45 ℃, HPLC测定阿魏酸含量为0.41 mg/g。叶酸,5 mg/片,天津飞鹰制药有限公司,批号 20140517;维生素 B6,

10 mg/片,天津力生制药股份有限公司,批号

20140220;维生素 B12,25 mg/片,山西云鹏制药有限公司,批号 20130608。

1.3 主要试剂与仪器

DL-蛋氨酸,Sigma 公司;同型半胱氨酸(Hcy)试剂盒,北京中生生物工程技术公司。手术刀剪(上海手术器械厂),电子分析天平(德国 Sartorius),低速离心机(江苏金壇仪器厂),显微镜(日本奥林巴 斯),微量移液器(德国 DRAGON 公司),超低温冰箱(海尔公司),酶标仪(澳大利亚TECAN 公司),全自动生化分析仪(迈瑞全自动生化分析仪)。

1.4 分组和造模

48只兔适应性喂养1周,随机分为正常组、模型组、当归挥发油组、当归多糖组、阿魏酸组和叶酸维生素组,每组8只。上述各组兔均限食,每兔100 g/d。

参照文献[6]方法制作动物模型,背部皮下注射 DL蛋氨酸 80 mg/(kg·d),2 mL/只,连续 12 周,标准兔饲料喂养。正常组背部皮下注射等量生理盐水,标

准兔饲料喂养。12周末终止实验。

1.5 干预

岷当归提取物各组灌胃剂量参照文献[7-9],当归挥发油 100 mg/(kg·d),当归多糖 120 mg/(kg·d),阿魏酸 2.5 mg/(kg·d);叶酸维生素组参照文献[10],给予叶酸+维生素 B6+维生素 B12 研碎后灌胃,叶酸 1.5 mg/(kg·d),维生素 B6 20 mg/(kg·d),维生素 B12 0.25 mg/(kg·d)。兔每日灌胃药液用量为

10 mL/kg,正常组和模型组给予等量灭菌水灌胃。各给药组造模第8周开始灌胃,共4周。

1.6 同型半胱氨酸测定

采用 ELISA测定,按试剂盒说明书操作。

1.7 脂代谢水平测定采用全自动生物化学分析仪测定。

1.8 兔腹主动脉病理观察

第 12 周末,空气栓塞法将实验兔处死。取髂外动脉约1 cm,纵行抛开,取降主动脉至腹主动脉分叉处血管,置于含10%多聚甲醛固定。取材、脱水、血管横断包埋、石蜡切片,光镜观察。

1.9 统计学方法

采用 SPSSl7.0 统计软件进行分析。计量资料以x±s 表示,组间对比采用独立样本 t 检验,组间两两

比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。2 结果

2.1 岷当归有效成分对模型兔血清同型半胱氨酸的影响

与正常组比较,模型组Hcy 水平明显升高(P<

0.05);与模型组比较,当归挥发油组、阿魏酸组和叶酸维生素组Hcy水平明显降低(P<0.05)。结果见表1。

2.2 岷当归有效成分对模型兔血清脂代谢水平的影响

与正常组比较,模型组 TC、TG、LDL-C 水平明

显升高(P<0.05);与模型组比较,当归挥发油组和阿魏酸组 TC、TG、LDL-C 水平明显降低(P<0.05),

叶酸维生素组和当归多糖组TC、TG、LDL-C 水平无

明显变化(P>0.05)。结果见表 2。

2.3 腹主动脉病理变化正常组血管壁薄且结构清晰,内膜光滑,平滑肌细胞排列整齐,内皮细胞结构连续完整,单侧紧贴内弹力板,内皮下未见脂质及炎性细胞浸润,中层平滑肌细胞排列整齐,呈长椭圆形,外膜结构清楚,未见明显病理改变;模型组血管壁增厚、变硬,似有增生,内中膜增厚,内膜下可见泡沫细胞,平滑肌细胞增生,内有脂质沉积,胶原纤维和弹性纤维增多,内膜中有大量巨噬细胞浸润,中层结构紊乱;叶酸维生素组、 3 讨论

血浆中 Hcy水平升高与心脑血管疾病关系密切。因环境因素或遗传因素而导致 Hcy 持续性超高称之为高同型半胱氨酸血症,可导致早期血管硬化[11],使AS 相关基因异常甲基化、细胞周期失控,从而促进AS 的发生及发展[12]。 当归挥发油组和阿魏酸组病变程度较模型组减轻;当归多糖组病变程度与模型组大致相当。结果见图1。

甘肃东南部岷县产的当归气味浓、油性足、产量大、质量最佳,习称“岷当归”。当归实际使用过程中的疗效并不相同,主要是当归中有效成分差异造成。研究表明,岷当归的水分含量、醇溶出物的含量、

挥发油含量等均优于其他产地当归的质量[13-15]。当归及其主要化学成分具有广泛的生物活性,对造血系

统、循环系统、神经系统等均有药理作用[16]。从当归植物的根、叶、地上部分、根茎、根内生菌等已分离鉴定出约 165 种或多达 213 种的化学成分[17],主要药效活性成分包括挥发油、有机酸、多糖等。当归挥发油是当归的脂溶性成分,含量约为 1%,主要含有藁本内酯、丁烯基苯酞,具有抗血小板凝聚、神经保护和镇痛消炎等作用;阿魏酸是当归中有机酸类化合物的代表,具有补血活血、抗炎和抗血小板聚集、提高机体免疫等多种功能;当归多糖是水溶性有效成分,其含量可达到15%,具有活血、抗肿瘤和调节免疫等

多种功效[18-19]。研究表明,当归及其主要化学成分具有抗AS 作

用[20-23]。本实验结果表明,兔皮下注射 DL-蛋氨酸 12周,模型组血清Hcy水平较正常组明显升高,表明模型制作成功,腹主动脉病理提示较为明显的AS征象。当归挥发油、阿魏酸不仅能降低血清Hcy、TC、TG、LDL-C 水平,且能减轻AS病变程度。

综上,岷当归及其有效成分具有调节脂肪代谢紊

乱、改善血管内皮功能、抗AS的作用。岷当归的主要提取物成分挥发油和阿魏酸能减轻高同型半胱氨酸血症对血管内皮的损伤,对高同型半胱氨酸血症致兔 AS病变起到防治作用。

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(收稿日期:2017-04-12)

(修回日期:2017-04-26;编辑:华强)

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