复方黄连膏中雄黄的质量控制

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曾祖平1,李彧 2,谭征3,韩旭阳1,彭冰 1,王宏1,何薇 1

1.首都医科大学附属北京中医医院,北京市中医研究所,银屑病中医临床基础研究北京市重点实验室,北京100010;

2.天津医科大学临床医学院,天津 300270;3.北京首儿药厂,北京 101304

摘要:目的 控制复方黄连膏中雄黄的质量。方法 对雄黄中毒性成分三氧化二砷采用古蔡氏法进行限度检查;对雄黄主要成分二硫化二砷利用硫酸钾、硫酸铵和硫酸消解后采用滴定法进行定量分析。结果 复方黄连膏中可溶性砷含量不高于15.6 μg/g,二硫化二砷含量不低于 2.21 mg/g。结论本方法简便易行,可以有效控制制剂中雄黄的质量。

关键词:复方黄连膏;雄黄;三氧化二砷;二硫化二砷

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2018.03.015

中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2018)03-0068-04

Quality Control of Realgar in Compound Huanglian Ointment

ZENG Zu-ping1,2, LI Yu2, TAN Zheng3, HAN Xu-yang1, PENG Bing1, WANG Hong1, HE Wei1

1. Beijing Hospital of TCM Affiliated to Capital Medical University, Beijing Institute of TCM; Beijing Key Laboratory of Clinic and Basic Research with Traditional Chinese Medicine on Psoriasis, Beijing 100010, China;

2. Clinical Medical College of Tianjin Medical University, Tianjin 300270, China;

3. Beijing Shouer Pharmaceutical Factory, Beijing 101304, China

Abstract: Objective To control the quality of realgar in compound Huanglian Ointment. Methods As2O3 which is the toxic component of realgar was carried limit test by Gutzeit's test; Potassium sulfate, ammonium sulfate and sulfuric acid were used to digest, and then titration method was used to determine the content of As2S2 in compound Huanglian Ointment. Results The content of the soluble As in compound Huanglian Ointment was no higher than

15.6 μg/g. The content of As2S2 in compound Huanglian Ointment was no less than 2.21 mg/g. Conclusion The method is simple and easy, which can be applied as the quantity control method of compound Huanglian Ointment. Keywords: compound Huanglian Ointment; realgar; As2O3; As2S2

复方黄连膏是首都医科大学附属北京中医医院的院内制剂(京药制字 Z20053395),具有清热止痒、解毒消肿止痛的功效,用于湿毒蕴结、瘀血留滞证,证见局部红肿瘙痒或热痛,皮损潮红灼热、瘙痒,舌红,苔黄,脉数,及脓疱病、湿疹、丹毒见上述证候。复方黄连膏由黄连、醋炙乳香、醋炙没药、雄黄、冰片等 11 味药组成。方中雄黄是国务院《医疗用毒性药品管理办法》中规定的 28 种毒性中药之一,具有明显的肝、肾毒性;研究表明,无机砷可诱发人类癌症,对人体有危害[1-2]。为此,本研究对雄黄进行质量控制,采用滴定法对主要成分二硫化二砷进行含量

基金项目:北京中医药科技发展资金项目(JJ2016-03)

通讯作者:何薇,E-mail:Hewei571124@163.com 测定,采用古蔡氏法对毒性成分三氧化二砷进行限度检查,为临床安全用药提供依据。

1 仪器与试药

分析天平(PB 203-N,METTLER TOLEDO),

超声波清洗器(SK7210HP,上海科导超声仪器有限

公司),水浴锅(SYQ-4,常州朗越仪器制造有限公司),电子调温电热套(DZTW,北京中仪泓瑞科技发展有限公司)。

复方黄连膏(批号 120140911 、20140922 、

20141029),首都医科大学附属北京中医医院;雄黄,北京同仁堂,按 2015 年版《中华人民共和国药典》(一部)方法测定,其中二硫化二砷含量为 91.66%;

0.050 30 mol/L 碘液、0.25 mol/L 硫酸,北京世纪科博有限公司,容量分析;其余试剂均为分析纯。

方法与结果

2.1 可溶性砷检查

2.1.1 标准砷溶液的制备称取三氧化二砷 0.132 g,置 1000 mL量瓶中,加20%氢氧化钠溶液 5 mL溶解,用适量稀硫酸中和,再加稀硫酸10 mL,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。

临用前,精密量取贮备液10 mL,置 1000 mL 量瓶中,加稀硫酸10 mL,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL相当于1 μg 砷)。

2.1.2 标准砷斑的制备

采用古蔡氏法[3]。分别精密量取标准砷溶液2 mL,置砷斑装置的磨口锥形瓶中,加盐酸5 mL、水 21 mL,再加入碘化钾试液5 mL与酸性氯化亚锡试液5滴,室温放置 10 min 后,加锌粒2 g,立即将装有醋酸铅棉花 60 mg的导气管(旋塞的顶端平面上放1片溴化汞试纸)密塞于磨口锥形瓶上,并将其置于25~40 ℃水浴中反应45 min,取出溴化汞试纸,即得标准砷斑。

2.1.3 供试品的制备

取复方黄连膏 3.20 g,共 3批,精密称定,加稀盐酸 20 mL,40 ℃水浴保温2 h,再振摇 10 min,超

声处理(350 W,53 kHz)30 min,过滤(取稀盐酸适量湿润定量滤纸),残渣用稀盐酸洗涤 2 次,每次

10 mL,搅拌 10 min,洗液与滤液合并,置 50 mL 量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

2.1.4 供试品测定精密量取供试品溶液 2 mL,按“2.1.2”项下方法制备并测定,结果3批复方黄连膏所显砷斑颜色均不深于标准砷斑,表明每1g复方黄连膏中可溶性砷含量不高于 15.6 μg。

2.2 二硫化二砷含量测定

2.2.1 供试品制备方法考察

2.2.1.1 去除软膏基质的溶剂选择复方黄连膏的主要基质为凡士林,根据其溶解特

性,选择石油醚(60~90 ℃)作为溶解基质的溶剂。取复方黄连膏约10 g,共 2份,精密称定,置于离心管中,加石油醚 30 mL,60 ℃水浴加热 15 min,

3000 r/min 离心 5 min,快速弃去上清液,底部剩余部分重复上述操作2次。最终残渣用少量石油醚洗涤并转移至锥形瓶中,水浴加热挥尽石油醚,放冷,加硫酸钾 2.0 g、硫酸铵 5.0 g、硫酸 30 mL[4-6],电热套中加热至溶液澄明,放冷,缓缓加水 100 mL,加热微沸 5 min,放冷。加酚酞指示剂4滴,用氢氧化钠溶

液(40→100)中和至微显红色后放冷,用 0.25 mol/L 硫酸溶液中和至褪色,加碳酸氢钠 5 g,摇匀后用

0.05 mol/L碘液滴定,临近终点时,加淀粉指示液3 mL,滴定至溶液显棕褐色。每1 mL碘液相当于 5.348 mg二硫化二砷。经计算,二硫化二砷的平均转移率为

76.29%,接近理论推算值,表明方法可行。

2.2.1.2 溶解温度考察加热有利于凡士林在石油醚中的溶解。分别考察

60、80 ℃水浴温度对测定结果的影响,按“2.2.1.1”项下方法操作,结果 80 ℃水浴的平均转移率较高于

60 ℃水浴,故选择80 ℃作为水浴温度,见表1。

为每

2.2.1.3 溶解次数考察

取复方黄连膏10 g,共 6份,置于离心管中,精

密称定,按“2.2.1.1”项下方法操作,80 ℃水浴,结果溶解 1 次的平均转移率高于溶解 2、3 次,故选择

加石油醚处理1次,见表2。

2.2.2 方法学考察

2.2.2.1 线性关系考察

分别取雄黄粉末0.013 7、0.034 0、0.062 0、0.092 0、

0.120 0 g,精密称定,分别置于锥形瓶中,加硫酸钾

2.0 g、硫酸铵 5.0 g与硫酸 30 mL,加热至溶液澄明,放冷,缓缓加水50 mL,加热 5 min后放冷,加酚酞指示液 2 滴,用氢氧化钠(40→100)中和至微显红色后放冷,用 0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色,加碳酸氢钠 5.0 g,摇匀后用 0.05 mol/L 碘液滴定,临近终点时,加淀粉指示液 3 mL,滴定至溶液显棕褐色,见表3。以消耗碘滴定液的体积(mL)为纵坐标,以

雄黄粉末的取样量(g)为横坐标,得回归方程 Y= 176.8X-0.479,r=0.999 0,表明二硫化二砷取样量在 12.6~110 mg 范围内与碘滴定液消耗体积呈良好的线性关系。

2.2.2.2 空白试验按处方量制备缺雄黄的阴性样品,加30 mL 石油

醚,80 ℃水浴 15 min,3000 r/min 离心 5 min,弃去

上清液后按“2.2.1.1”项下方法测定,结果消耗的碘

滴定液(0.1 mol/L)为 4滴,说明样品中除雄黄外的

2.2.3 样品含量测定

取复方黄连膏10 g,共 3批,每批3份,精密称定,置于离心管中,加30 mL 石油醚,80 ℃水浴15 min,

3000 r/min 离心 5 min,弃去上清液,残渣用少量石油醚洗涤并转移至锥形瓶中,水浴加热挥尽石油醚,放冷,加硫酸钾 2.0 g、硫酸铵 5.0 g、硫酸 30 mL,电热套中加热至溶液澄明,放冷,缓缓加水 100 mL,加热微沸5 min,放冷。加酚酞指示剂4滴,用氢氧

化钠溶液(40→100)中和至微显红色后放冷,用

0.25 mol/L硫酸溶液中和至褪色,加碳酸氢钠5.0 g,摇匀后用 0.05 mol/L碘液滴定,临近终点时加淀粉指示液 3 mL,滴定至溶液显棕褐色,见表5。 由处方得知,每1g复方黄连膏中含雄黄3.07 mg。考虑药品制备过程中损失,假定为20%,同时考虑雄 其他成分对二硫化二砷的测定基本无干扰。

2.2.2.3 重复性试验取同一批号(批号 20140911)样品约 10 g,精密称定,共6份,分别加30 mL 石油醚,80 ℃水浴

15 min,3000 r/min 离心 5 min,弃去上清液后按

“2.2.1.1”项下方法测定。结果二硫化二砷平均含量为 2.714 mg/g,RSD=1.96%,表明本方法的重复性良好。

2.2.2.4 加样回收率试验取同一批号(批号20140911)已知含量(2.714 mg/g)样品约 5 g,精密称定,共 6份,分别精密加入已知

二硫化二砷含量(91.6%)的雄黄粉末约 14.80 mg,置于离心管中,分别加入石油醚 30 mL,80 ℃水浴

15 min,3000 r/min 离心 5 min,弃去上清液后按

“2.2.1.1”项下方法测定,计算加样回收率,结果平均回收率为 93.71%,RSD=1.87%,见表 4。 黄纯度(药典规定雄黄中二硫化二砷含量不得少于

90.0%),则暂定每 1 g复方黄连膏中二硫化二砷不低于 2.21 mg。检测的 3批复方黄连膏均符合要求,说明雄黄原料按工艺处方基本足额投料。

3 讨论雄黄入药始载于《神农本草经》(称黄食石)。许多中药制剂均含有雄黄,如安宫牛黄丸、牛黄解毒丸(片)、局方至宝散等。雄黄的主要成分是二硫化二砷,而所含的微量三氧化二砷(俗称砒霜)是其毒性

成分[7]。因此,有效控制含雄黄制剂中二硫化二砷和三氧化二砷的含量具有必要性。

进行三氧化二砷限度检查时,本研究采用 2015年版《中华人民共和国药典》(四部)通则0822 收载的可溶性砷盐检查方法第一法(古蔡氏法),利用无砷金属锌与酸反应产生新生态的氢,再与样品中微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢,砷化氢遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑,将其与同一条件下定量的标准砷溶液所产生的砷斑进行比较,来判断样品中砷盐的限度。与标准砷斑比较后,经计算,每1 g

复方黄连膏中可溶性砷盐含量不高于15.6 μg。

进行二硫化二砷含量测定时,首先将药品消解,再采用滴定法测定。复方黄连膏中存在大量软膏基质

凡士林,会干扰含量测定结果[8],预试验也验证了这一结论,因此有必要去除软膏基质。根据相似相溶原理,应选取非极性溶剂去除基质。石油醚具有挥发快、沸点低且不与样品药物发生反应的特点,故本研究选

取石油醚(60~90 ℃)作为去除复方黄连膏中基质的溶剂。

在建立二硫化二砷含量测定方法时发现,样品的消解过程对测定结果影响较大。起初按药典方法加入消解过程所需试剂量,结果反应不彻底,测定结果偏低;而后参考文献方法加大了试剂用量,反应基本完全,方法学考察结果表明所建立的方法可行。

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(收稿日期:2017-09-26)

(修回日期:2017-10-17;编辑:陈静)

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