采用不同的加热温度分离芽孢杆菌。从表1可以看出,80~ 90 ℃分离得到的芽孢杆菌多;不同厂家大曲的芽孢杆菌种类差别也较大。

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2.2 菌种初筛将分离到的芽孢杆菌点接到脱脂奶粉平板上,观察各菌的透明圈大小及菌落大小,测量透明圈的直径与菌落直径,并记录各自的R值,详见表2。 B- B- B- B-菌株 2、 6、 7、 9透明圈菌落直径比R比较大,说明这些菌株分泌蛋白酶并分解蛋白质产生氨基酸的能力较强,可选为复筛的菌株。2.3 菌种复筛利用气相色谱法对发酵液中的四甲基吡嗪含量进行测定,标准品的色谱图及样品的色谱图分别见图2和图3,从图3可以看出,在选定的色谱条件 下,四甲基吡嗪与其他物质分离良好,该方法可用于检测发酵液中的四甲基吡嗪。 图2 四甲基吡嗪标准品色谱图 图3 样品色谱图 将初筛得到的较优菌种接种到发酵培养基中进行复筛,发酵液四甲基吡嗪含量的结果见图4。从图4可知,所筛选的4株菌具有较高的四甲基吡B-嗪产量,其中 2的产量最高,可达 21.39 mg/L。结果表明,通过考察菌株蛋白酶活性对菌株进行初筛是可行的。2.4 菌种分子鉴定将4株高产TTMP的芽孢杆菌进行16S rDNA B- B-序列测定,进行序列同源性分析,确定 2、 9 为B- B-枯草芽孢杆菌属( Bacillus subtilis), 6、 7为地衣芽孢杆菌属( Bacillus licheniformis)。2.5 生产应用B- B-选择 2和 7菌分别制作麸曲,用于大曲酒

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