· Simultaneous Determination of 12 Kinds of Monophenols in Grape Wine by HPLC TIAN Chao et

田 超,侯红萍(山西农业大学食品科学与工程学院山西太谷 030801)

Liquor-Making Science and Technology - - Contents -

摘要:采用乙酸化水配合乙腈为流动相,建立一种能同时测定葡萄酒中包括白藜芦醇苷在内的12

μm - -种单体酚的检测方法。结果表明,在250×4.6 mm,5 色谱柱下,使用水 乙酸 乙腈为流动相。进样

μL, μL/量10 柱温30 ℃,流速1.0 min。并采用梯度洗脱程序,在280 nm及320 nm检测波长下,单体酚分离有效,结果满意。并以此方法对山西省内不同小产区出产的商品葡萄酒进行了单体酚检测。关键词: 葡萄酒; 高效液相色谱; 单体酚1001- 07-0065-中图分类号: TS262.6;TS261.7;TS261.4 文献标识码: A 文章编号: 9286(2018) 05

Simultaneous Determination of 12 Kinds of Monophenols in Grape Wine by HPLC TIAN Chao and HOU Hongping (College of Food Science and Engineering, Shanxi Agricultural University, Taigu, Shanxi 030801, China)

Abstract: A new HPLC method for detecting the content of 12 kinds of monophenols including polydatin had been developed. Satis

μm factory experimental results were obtained under the following conditions: 250 mm×4.6 mm, 5 column used, gradient elution

μL/ μL, with acetonitrile- acid water as the mobile phase at 30 ℃, the flow rate was 1.0 min, the injection was 10 and the determination wavelength was 280 nm/320 nm. In the experiment, the method was used for the determination of monophenols in grape wine produced in different regions in Shanxi. Key words: grape wine; HPLC; monophenols

多酚类物质是葡萄酒的重要功能成分。其中的无色多酚类又可分为类黄酮、酚酸、芪类物质等物质。葡萄酒中多酚物质的保健作用,特别是白藜芦醇对心脑血管的保护作用日益突显并被消费者广泛接受[ 1],因此葡萄酒中多酚含量也成为葡萄酒生产及市场关注的重要指标。目前葡萄酒中的多

-酚类检测仪器以高效液相色谱及高效液相色谱 质

[2]谱连用 为主。而高效液相色谱检测多酚类物质的

[3]方法,亦广泛应用于葡萄酒与健康、葡萄酒工艺 、

[4]酿酒葡萄栽培 等学术研究领域。

目前已有的高效液相色谱检测多酚方法的研究很多。但随着对白藜芦醇和白藜芦醇苷的研究,有报道表示白藜芦醇苷可作为整体被生物吸收利用[ 5],独立完成某些保健功能。因此试验尝试建立一种包含白藜芦醇苷在内的葡萄酒多酚同时检测方法。 1 材料与方法1.1 材料、试剂及仪器

Agilent U3000高效液相色谱仪(包括色谱泵,

DAD-自动进样器, UV紫外检测仪), Scientific

5μm Thermo Hypersil Gold 250×4.6mm 液相色谱柱。HPLC级标准品:儿茶素,没食子酸,杨梅素,香草酸,表儿茶素,阿魏酸,白藜芦醇苷,芦丁,白藜芦醇,槲皮素,山萘酚。HPLC级试剂:超纯水,乙腈,乙酸( 38 %,v/v)。1.2 样品萃取

[6]萃取采用以韩国民等方法 的一种改进方法:取葡萄酒样30 mL,加入30 mL乙酸乙酯,以摇床低速摇匀30 min萃取,共3次,合并有机相后置于薄膜旋转蒸发仪( 40 ℃下)蒸发至干,后用2 mL乙

μm腈溶解,经0.45 滤膜过滤,制成样品备用。1.3 标准溶液的配制

取没食子酸等12种标准品各20 mg,溶于10 mL乙腈,并依梯度稀释至5~150 mg/L配制成标准溶

-液及混合标准溶液,所有样品使用前于 30 ℃温度条件下保存。1.4 最佳检测波长

通过已有文献结合实际检测确定最佳紫外检测波长为280 nm。对咖啡酸的检测应使用320 nm。1.5 色谱条件的确定

已有文献表示:葡萄酒中无色单体酚的检测多采用有机相++酸 水的流动相组合7],并采用梯度洗

[ [8]脱程序 。而白藜芦醇的检测,流动相大多为有机相(甲醇[9]或乙腈[ 10])和水的混合配比。且流动相中

-的有机相 水,在一定比例下调整,对白藜芦醇出峰

[11]时间有较大影响,而对洗脱回收率影响不大 。

综合考虑,色谱条件采用:采取流动相A:水+乙酸4 %(v/v),流动相B:乙腈的搭配方法。并设

μL, μL/定进样量10 柱温30 ℃,流速1.0 min。

以已有的方法为基础[ 12],结合白藜芦醇及白藜芦醇苷的检测需要,设置一种改进的梯度洗脱程序,见表1。 2 结果与讨论 2.1 各种物质保留时间的确定分别对12种物质标准品单独进样,记录保留时间。再对混合标准溶液进样获得检测图谱如图 图在2 320 nm检测波长下12种单体酚标准品色谱图

由图1、图2可知,香草酸在 320 nm检测波长

[12]下无较强吸收,与孙翔宇等 研究结果相同。故使其可与保留时间相对接近的咖啡酸相区别。因此在以下分析中,咖啡酸采用 320 nm波长检测通道的数据,其余物质使用 280 nm波长检测通道下的数据。2.2 各物质保留时间和标准曲线

对各个不同浓度梯度混合标样进样,建立标准曲线,结果如表2。12种单体酚含量与检测值之间线性关系良好,线性相关系数均大于0.999,符合检测需求。各单体酚最低检测线较低,能符合定量检测要求,灵敏度相对较高。2.3 重复性测试

在上述液相色谱条件下,取同一标样连续进样 6次,记录其保留时间(表3)和峰面积(表4)。2.4 稳定性测试

取6个间隔时间不同的标准品进行进样检测,记录各物质检测峰面积,如表4。

经统计分析,各物质保留时间的RSD值均较小,远低于2%。标准品峰面积差值RSD均低于5%。液相色谱工作重复性、稳定性良好。2.5 加标回收率

根据样品中不同物质含量不同,选择添加相应合适浓度的标样重复测量5次。依照公式计算加标回收率。结果如表5。

由表5 可知,每种单体酚加标回收率均大于80 %,大于检测可接受下限。RSD均小于5 %,检测方法可行。

2.6 葡萄酒样品测定葡萄酒酒样来自市售及酒庄赞助。葡萄采摘年份均为2010年。以上述色谱条件进行单体酚检

测,每种酒样重复3次。葡萄酒酒样进样获得检测图谱如图3、图4,单体酚含量分析结果见表6。

图在4 320 nm检测波长下葡萄酒样品色谱图

3 结论与展望

葡萄酒内的总酚及单体酚含量仍然是未来葡萄酒领域持续关注的重要问题。高效液相色谱在可溶性高沸点有机物分离检测上仍占据核心地位。通过本次试验,建立了一种基于 4.6 mm色谱柱,280 nm和320 nm检测波长,以水、冰乙酸、乙腈 为流动相的葡萄酒单体酚检测方法。并对该方法的分离度、重复性、稳定性,加标回收率等指标进行了考察,结果满意。以此检测方法对山西省不同地区几款葡萄酒进行了检测。使该检测方法可为葡萄酒类研究提供一种单体酚的快速检测方法。

参考文献:

[1] 姚乾元.红葡萄酒保护心血管的功效[J].食品与药品,

2006(1): 72- 73. [2] FLAMINI R, TRALDI P. Mass spectrometry in grape

and wine chemistry[M]. John Wiley & Sons, 2009. [3] EL DARRA N, TURK M F, DUCASSE MA, et al. Changes in polyphenol profiles and color composition of freshly fermented model wine due to pulsed electric field, enzymes and thermovinification pretreatments[J].

944- Food chemistry, 2016, 194: 950. [4] 刘文忠,奚德智,刘欠欠,等.葡萄多酚的保健作用及其在酿酒葡萄成熟度判定中的应用[J].中国酿造,2008 1- (21): 6. [5] 李雪,徐江平.反式白藜芦醇苷在大鼠体内的药物动力664-学[J]. 广东医学,2006(5): 665. [6] 韩国民,陈锋,侯敏,等.葡萄酒中14种单体酚的高效液180-相色谱测定[J]. 食品科学,2011,32(2): 183. [7] 温鹏飞,陈建业,黄卫东,等. HPLC法同时测定葡萄酒中- 3- 5种黄烷 醇单体的研究[J]. 中国食品学报,2006(3): 133- 137. - [8] 翁鸿珍,岳泰新,成宇峰.固相萃取 高效液相色谱法测164-定葡萄酒多酚物质[J]. 中国酿造,2009(3): 166. [9] 李华,张予林,袁春龙,等.葡萄与葡萄酒中白藜芦醇分析方法的研究现状[J].中国食品学报,2005,5(1): 107- 111. [10] 鲍会梅.葡萄酒中白藜芦醇含量影响因素的探讨[J]. 164-中国酿造,2011(7): 167. [11] 周晓明,郭春苗,樊丁宇,等. HPLC 法测定不同品种葡萄及葡萄干白藜芦醇含量[J].新疆农业科学,2013,50 2223- (12): 2229. RP- [12] 孙翔宇,杜国荣,马婷婷,等. HPLC 法同时测定葡萄酒、果酒、果醋中16种单体酚的含量[J].现代食品201-科技,2014(12): 209.

注: 1.儿茶素,2.没食子酸,3.杨梅素,5.香草酸,6.表儿茶素,7.阿魏酸,8.白藜芦醇苷,9.芦丁,10.白藜芦醇,11.槲皮素,12.山萘酚。

注: 1.儿茶素,2.没食子酸,3.杨梅素,4.咖啡酸,6.表儿茶素,7.阿魏酸,8.白藜芦醇苷,9.芦丁,10.白藜芦醇,11.槲皮素,12.山萘酚。

1、图2,检查各峰并对比保留时间,各物质出峰清晰,分离度满意。

注: 1.儿茶素,2.没食子酸,3.杨梅素,4.咖啡酸,6.表儿茶素,7.阿魏酸,8.白藜芦醇苷,9.芦丁,10.白藜芦醇,11.槲皮素,12.山萘酚。

注: 1.儿茶素,2.没食子酸,3.杨梅素,5.香草酸,6.表儿茶素,7.阿魏酸,8.白藜芦醇苷,9.芦丁,10.白藜芦醇,11.槲皮素,12.山萘酚。

Newspapers in Chinese (Simplified)

Newspapers from China

© PressReader. All rights reserved.