电针对血管性认知障碍大鼠学习记忆能力及脑组织炎症因子的影响

CJI (Traditional Chinese Medicine) - - 中国中医药信息杂志 - 基金项目:国家自然科学基金重点项目(81430100) 通讯作者:王朝阳,E-mail:xlywzy@163.com

冯琪,尚华杰,刘美琪,林昭雁,邱灵慧,臧颖颖,陈昕力,刘玥婷,陈慧昀,王朝阳

北京中医药大学针灸推拿学院,北京 100029

摘要:目的 观察电针对血管性认知障碍(VCI)大鼠学习记忆能力和大脑皮层炎症因子的影响,探讨针刺防治 VCI的作用机制。方法 采用颈内动脉微栓子体外注入法制备VCI大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、阳性药组和电针组,同时取正常大鼠作为对照组。造模3 d后,阳性药组给予盐酸多奈哌齐药液灌胃,电针组针刺“百会”“足三里”。治疗结束后,采用 Morris 水迷宫检测大鼠学习记忆能力,ELISA 检测大鼠脑

组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β 的含量。结果 定位巡航实验随训练次数的增加,阳性药组和电针组大鼠寻找平台平均逃避潜伏期较模型组均有不同程度的缩短;空间探索实验阳性药组和电针组较模型组首次穿越平台所需时间显著缩短;与对照组比较,模型组 TNF-α、IL-6、IL-1β 含量显著升高;与模型组比较,阳性药组和电针组 TNF-α、IL-6、IL-1β 含量均显著降低。结论 电针“百会”“足三里”可能通过降低 VCI大鼠大脑皮层 TNF-α、IL-6 和 IL-1β的含量,改善大鼠学习记忆能力。关键词:血管性认知障碍;电针;百会;足三里;炎症因子;学习记忆能力;大鼠

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2018.06.010

中图分类号:R245 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2018)06-0039-05

Effects of Electroacupuncture on Learning and Memory Ability and Brain Inflammatory Factor in Rats with Vascular Cognitive Impairment

FENG Qi, SHANG Hua-jie, LIU Mei-qi, LIN Zhao-yan, QIU Ling-hui, ZANG Ying-ying,

CHEN Xin-li, LIU Yue-ting, CHEN Hui-yun, WANG Zhao-yang

School of Acupuncture and Moxibustion, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China Abstract: Objective To observe the effects of electroacupuncture on the learning and memory ability and cerebral cortex inflammatory factor of rats with vascular cognitive impairment (VCI); To discuss the mechanism of electroacupuncture for preventing and treating VCI. Methods VCI rat models were made in microemboli injection through internal carotid artery method. The successful modeled rats were randomly divided into model group, positive medicine group and electroacupuncture group, and normal rats were taken as control group. Three days after rat models were established, the positive medicine group was given donepezil hydrochlorideby gavage, and electroacupuncture group was given electroacupuncture at “Baihui” and “Zusanli” acupoints. After treatment, the learning and memory ability was detected by Morris water maze test. The contents of TNF-α, IL-6 and IL-1β in rat brain tissue were detected by ELISA. Results The water maze results showed that with the increase of the number of training, the average escape latency of rats to find platform in positive medicine group and electroacupuncture group all had different degrees of shortening in positioning cruise experiment; in space exploration experiment, positive medicine group and electroacupuncture group to cross the platform area for the first time were significantly reduced compared with the model group; compared with the control group, the contents of TNF-α, IL-6 and IL-1β in the model group were increased significantly; compared with the model group, the contents of TNF-α, IL-6 and IL-β in

postive medicine group and electroacupuncture group were decreased. Conclusion Electroacupuncture at “Baihui” and “Zusanli” acupoints can decrease the contents of TNF-α, IL-1 and IL-6 in the cortex of VCI rats, and improve the learning and memory ability of rats.

Keywords: vascular cognitive impairment; electroacupuncture; Baihui; Zusanli; inflammatory factor; learning and memory ability; rats

腔隙性脑梗死是大脑或脑干深部的小穿通动脉管壁发生病变,最终管腔闭塞导致的缺血性微梗死,是脑梗死的常见亚型之一。血管性认知功能障碍(vascular cognitive impairment,VCI)是由所有脑血管危险因素、明显或不明显的脑血管病引起的从轻度认知障碍到痴呆的一大类综合征。腔隙性脑梗死是导致 VCI的主要原因之一,腔隙性脑梗死后2年内约有

60%患者出现 VCI[1-2]。研究表明,急慢性脑缺血会引起脑内的炎症反应,产生大量损害神经细胞的炎症因

子,是造成中枢神经损伤的重要原因[3]。督脉入络脑,百会为督脉阳气至盛之穴,是治疗呆证第一穴;足三里为足阳明胃经合穴,为治疗VCI 配穴的首选[4]。针刺百会、足三里治疗VCI疗效显著,能明显改善患者

症状和认知功能[5-6],增强大鼠海马神经元突触传递分子蛋白激酶C的活性[7],改善慢性脑低灌注引发的大鼠前额叶皮层神经元损伤,抑制氧化应激,减轻学

习记忆的损害[8-9]。然而,目前针刺“百会”“足三里”对 VCI大鼠脑组织炎症因子的影响尚不明确。本研究制备 VCI大鼠模型,模拟多发性腔隙性脑梗死发病过程,选取“百会”“足三里”行电针干预,观察大鼠学习记忆能力及脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白

细胞介素(IL)-6、IL-1β 的含量变化,探讨针刺防治 VCI的作用机制。

1 实验材料

1.1 动物

健康 SD大鼠 80 只,SPF 级,雌雄各半,2月龄,

体质量(180±20)g,北京维通利华实验动物技术有限公司,动物许可证号 SCXK(京)2016-0006。饲养于北京中医药大学东方医院实验动物中心 SPF 级动

物实验室,屏障环境[SYXK(京)2014-0008],饲养

温度(24±2)℃,相对湿度 40%~60%,光照周期为明暗各 12 h,实验过程中各组大鼠自由摄食饮水,术前 12 h禁食。

1.2 药物盐酸多奈哌齐片,卫材(中国)药业有限公司,批号 1609047。

1.3 主要试剂与仪器

BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限 公司),高效 RIPA 裂解液(北京索莱宝科技有限公司),TNF-α 酶联免疫试剂盒(碧云天生物技术有限

公司),IL-6 酶联免疫试剂盒(碧云天生物技术有限

公司),IL-1β酶联免疫试剂盒(碧云天生物技术有限公司)。华佗牌电针治疗仪(SDZ-Ⅱ,苏州医疗用品

厂有限公司),0.25 mm×25 mm 华佗牌无菌针灸针(苏州医疗用品厂有限公司),Morris 水迷宫实验系

统(DMS-2,中国医学科学院药物研究所),电子天

平(BS124S,北京赛多利斯仪器系统有限公司),离心机( 5424R , Eppendorf ),电热恒温鼓风干燥箱

(DHG-9145A型,上海一恒科技有限公司),酶标仪

(ELX800,美国 BIO-TEK 仪器有限公司)。

2 实验方法

2.1 分组及造模

随机选取SD大鼠雌雄各6只作为对照组,其余

68 只采用颈内动脉微栓子体外注入法制备 VCI 大鼠

模型[10-11]。造模过程中死亡 25 只,失败 7 只,造模成功纳入实验大鼠 36 只,按照随机数字表法将其分配至模型组、阳性药组和电针组,每组 12 只。本研究经动物伦理委员会审核,符合动物保护、福利和伦理原则,符合国家实验动物福利伦理的相关规定。

取同种大鼠血液,置于烘箱内无菌干燥成块,研

碎,200 —m筛孔过筛备用,使用时用无菌生理盐水加血凝块匀浆制成混悬液,栓子浓度为30 mg/mL。大鼠术前 12 h禁食,腹腔注射水合氯醛(0.4 mL/100 g)麻醉,大鼠仰卧固定于固定台上,充分暴露颈部,颈部正中常规备皮,PV 碘消毒后行颈部正中切开术,暴露颈总动脉,暂时夹闭,于左侧颈外动脉处逆行插管,注入栓子盐水 0.3 mL 后,立即结扎左侧颈外动脉,同时开放颈总动脉,使栓子由颈内动脉进入脑内,形成多发性腔隙性脑梗死。

2.2 模型判定标准术后观察造模大鼠行为表现,采用Longa 5 分法

进行神经功能缺损评分[12]。5分:无任何自发活动;

4 分:自发向对侧转圈或倾倒;3 分:拖住大鼠尾部

向后拉时,向对侧转圈;2 分:拖住大鼠尾部向后拉

时,对侧肢体无力;1 分:对侧肢体屈曲;0 分:正常。大鼠评分1~4分者纳入实验。

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