补肾健脾方对人结肠癌移植瘤生长及血清血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶7表达的影响

王元惠 1，2，冯媛媛 2，韩植芬2，孙筱婷2，刘宣2，邓皖利2，李琦 2

1.上海市虹口区江湾医院，上海 200434；2.上海中医药大学附属曙光医院，上海 201203摘要：目的 观察补肾健脾方对人结肠癌移植瘤生长及血清血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶7（MMP-7）表达的影响，探讨其抗结肠癌的部分作用机制。方法 裸鼠腋下接种人结肠癌细胞，建立人结

肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为模型组、5-氟尿嘧啶组和补肾健脾方低、中、高剂量组，各给药组给予相应药物，连续3周。各组处死6只荷瘤鼠，测量瘤体质量，计算相对抑瘤率；ELISA测定血清 VEGF 及 MMP-7表达；剩余荷瘤鼠用于观察生存时间。结果 补肾健脾方各剂量组瘤体质量较模型组均明显降低，荷瘤鼠生存时间较模型组明显延长；与模型组比较，补肾健脾方各剂量组 VEGF、MMP-7 表达均明显下降。结论 补肾健脾方可抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤生长、延长荷瘤鼠生存时间，其机制可能与下调 VEGF、MMP-7 表达有关。

关键词：补肾健脾方；结肠癌；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶7；BALB/c 裸鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.06.013

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2018)06-0053-03

Effects of Bushen Jianpi Prescription on Tumor Growth in Subcutaneous Colorectal Cancer Xenografts in Mice and Expressions of VEGF and MMP-7

WANG Yuan-hui1,2, FENG Yuan-yuan2, HAN Zhi-fen2, SUN Xiao-ting2, LIU Xuan2, DENG Wan-li2, LI Qi2

1. Jiangwan Hospital, Hongkou District, Shanghai 200434, China;

2. Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China Abstract: Objective To investigate the effects of Bushen Jianpi Prescription on tumor growth in subcutaneous colorectal cancer xenografts in mice and expressions of VEGF and MMP-7; To discuss its mechanism of anti-colon cancer. Methods Nude mice were inoculated subcutaneously into human colon cancer cells to establish human colon cancer xenograft models. Nude mouse models of subcutaneous colorectal cancer xenografts were randomly divided into model group, 5-FU group, Bushen Jianpi low-, medium-, and high-dose groups. Each medication group was given relevant medicine for three weeks. Six tumor-bearing mice in each group were sacrificed. Tumor mass was measured, and the relative inhibition rate was calculated. The serum levels of VEGF and MMP-7 were measured by ELISA. The remaining tumor-bearing mice were used to observe the survival time. Results Compared with model group, the weight of tumor were reduced and the median survival time of mice were prolonged in Bushen Jianpi groups, as well as the expression levels of VEGF and MMP-7 significantly decreased Bushen Jianpi groups. Conclusion Bushen Jianpi Prescription can inhibit the growth of human colon cancer xenografts in nude mice and prolong the survival time of tumor-bearing mice, which may be related to the down-regulation of the expressions of VEGF and MMP-7.

Keywords: Bushen Jianpi Prescription; colorectal cancer; VEGF; MMP-7; BALB/c nude mice

结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型，采用补肾健脾方进行干预，观察其对人结肠癌裸鼠移植瘤的作用，探讨其抗结肠癌的部分机制，为其临床应用提供依据。1 实验材料

1.1 细胞株与动物

人结肠癌细胞株LoVo，上海博谷生物有限公司。雄性 BALB/c 裸鼠 80 只，SPF 级，4～6 周龄，体质量 18～20 g，上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号 SCXK（沪）2016-0019。饲养于上海中医药大学 SPF级实验动物中心。

1.2 药物补肾健脾方由黄芪、白术、女贞子、肉苁蓉、野葡萄藤、石见穿、八月札组成，其提取物由上海医药工业研究院制备及质量控制。

1.3 主要试剂与仪器

F12K培养基及胎牛血清，美国Gibco 公司；5-氟

尿嘧啶（5-FU），上海旭东海普药业有限公司；人血管内皮生长因子（ VEGF ）、人基质金属蛋白酶 7

（MMP-7）ELISA试剂盒，上海博谷生物科技有限公司。双人垂直流超净工作台（新加坡ESCO），台式低速离心机（德国 Eppendorf），荧光倒置显微镜（日本

OLMYPUS），CO2培养箱（英国 RSBiotech）。2 实验方法

2.1 细胞培养

F12K 培养基（10%胎牛血清、1.5 g/L 碳酸氢钠、

1.5 mmol/L L-谷氨酰胺）培养人结肠癌 LoVo 细胞，置于 37 ℃、饱和湿度、5%CO2孵箱。

2.2 人结肠癌裸鼠移植瘤模型建立将人结肠癌 LoVo 细胞制成浓度为 1×107/mL 悬液。取3 只 BALB/c裸鼠，将细胞悬液接种于裸鼠背部近右上肢皮肤（其中一只双侧上肢皮肤），接种量

0.2 mL/只。待瘤体生长直径达 1～1.2 cm，选择肿瘤瘤体生长相对比较旺盛且无溃破荷瘤鼠作为供瘤鼠，剥取瘤体，去除坏死组织及纤维组织，选择肿瘤边缘相对比较新鲜的肿瘤组织，将其剪成约1 mm3，无菌环境将其接种到裸鼠右侧腋窝的皮下。按上述方法予以传代2代后，将肿瘤组织大量接种于裸鼠腋窝皮下，构建人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。待肿瘤生长到体积约 100～300 mm3，进行后续实验。

2.3 分组及给药

将动物随机分为模型组、5-FU 组和补肾健脾方低剂量（BSJP-L）、中剂量（BSJP-M）、高剂量（BSJP-H）组，每组 12 只。BSJP-L 组、BSJP-M 组、BSJP-H 组予补肾健脾方提取物 250、500、1000 mg/（kg·d）

灌胃，5-FU 组每 2d腹腔注射 5-FU 50 mg/kg，模型组予等体积生理盐水灌胃。给药体积均为5 mL/kg，连续 3 周。

2.4 检测指标

实验期间每隔1d测量肿瘤直径并称定裸鼠体质量。给药3周后将每组6只裸鼠处死后摘除眼球并取血，收集血清，取出移植瘤瘤体，测量瘤体长、短径及质量，瘤体用福尔马林固定，石蜡包埋。计算肿瘤

体积（TV＝ab2/2，a、b分别表示肿瘤长、短径）和抑瘤率[（l－实验组平均瘤质量÷对照组平均瘤质量）×

100%]。每组剩余 6 只裸鼠用于观察生存时间，计算生存延长率[（治疗组平均生存天数－对照组平均生

存天数）÷对照组平均生存天数×100%]。ELISA 检测血清 VEGF 和 MMP-7 表达，严格按试剂盒说明书进行操作。

3 统计学方法

采用 SPSS18.0 统计软件进行分析。计量资料以x±s — 表示，采用方差分析，组间比较用t 检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

4 结果4.1 补肾健脾方对人结肠癌裸鼠移植瘤抑瘤率的影响随给药时间延长，各组瘤体体积大小逐渐出现差

距，各给药组瘤体质量小于模型组（P＜0.05，P＜0.01）；

各给药组抑瘤率比较差异明显（P＜0.01）。结果见表1。