首乌藤饮片标准汤剂质量标准研究

范帅帅1，高乐 1，2，3，田伟 1，2，3，甄亚钦 1，2，3，李军山 2，3，4，牛丽颖 1，2，3

1.河北中医学院，河北 石家庄 050091；2.河北省中药配方颗粒工程技术研究中心，河北 石家庄 050091；

3.河北省高校中药配方颗粒应用技术研发中心，河北 石家庄 050091；

4.神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430

摘要：目的 制备首乌藤饮片标准汤剂，并进行质量标准研究。方法 按照标准汤剂的制备要求，制备

15批不同产地首乌藤饮片的标准汤剂，以 2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作为定量检测指标，计算其转移率及出膏率，并建立超高液相色谱特征图谱分析方法。结果 通过对 15 批

首乌藤饮片标准汤剂进行测定，2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的转移率为 3.94%～53.53%，大黄

素-8-O-β-D-葡萄糖苷的转移率为 2.53%～37.06%，出膏率为 1.46%～15.91%。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件进行特征图谱分析，标定了14个共有峰，指认了其中4 个色谱峰。15批首乌藤饮片标准汤剂相似度评价结果显示，其相似度均大于0.90。结论 首乌藤饮片标准汤剂制备规范，测定方法精密度、稳定性和重复性良好，可为首乌藤配方颗粒的质量控制提供参考。关键词：首乌藤；标准汤剂；转移率；出膏率；特征图谱

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2019)01-0090-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.01.021 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Study on Quality Standard of Polygoni Multiflori Caulis Standard Decoction

FAN Shuaishuai1, GAO Le1,2,3, TIAN Wei1,2,3, ZHEN Yaqin1,2,3, LI Junshan2,3,4, NIU Liying1,2,3

1. Hebei University of Chinese Medicine, Shijiazhuang 050091, China;

2. Hebei TCM Formula Granule Engineering & Technology Research Center, Shijiazhuang 050091, China;

3. TCM Formula Granule Research Center of Hebei Province University, Shijiazhuang 050091, China;

4. Shineway Pharmaceutical Group Ltd., Shijiazhuang 051430, China

Abstract: Objective To prepare Polygoni Multiflori Caulis standard decoction; To study the quality standard. Methods The standard decoction of fifteen batches of Polygoni Multiflori Caulis from different producing areas were prepared according to the standardization method. With 2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-Ο-β-D-glucoside and emodin8-Ο-β-D-glucopyranoside EG as the detection indexes, the transfer rate and extraction rate were calculated and the UPLC characteristic chromatograms analysis method was established. Results According to the measurement of 15 batches of Polygoni Multiflori Caulis standard decoction, the transfer rate of 2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-Ο-β-Dglucoside and emodin-8-Ο-β-D-glucopyranoside ranged from 3.94% to 53.53% and 2.53% to 37.06% and extraction rate was at the range of 1.46%–15.91%. Besides, the Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of TCM was used to analyze and compare the characteristic chromatograms. Fourteen common peaks were determined and four were identified. The similarity evaluation results of 15 batches of Polygoni Multiflori Caulis standard decoction showed that the similarity was greater than 0.90. Conclusion The preparation of Polygoni Multiflori Caulis standard decoction is standard, and determination method is precise, stable and repeatable, which can provide references for quality control of Polygoni Multiflori Caulis formula granules.

Keywords: Polygoni Multiflori Caulis; standard decoction; transfer rate; extraction rate; characteristic chromatograms

基金项目：河北省高等学校科学技术研究项目（ZD2015001）

通讯作者：牛丽颖，E-mail：niuliyingyy@163.com

首乌藤为蓼科植物何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.的干燥藤茎，功效养血安神、祛风通络，用于失眠多梦、血虚身痛、风湿痹痛、皮肤瘙痒[1]。首乌

藤主要含有蒽醌类、二苯乙烯苷类、黄酮类等成分，

含量较高的代表性化合物为大黄素、大黄素-8-O-β-D

葡萄糖苷（emodin-8-O-β-D-glucopyranoside，EG）、

2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（二苯乙

烯苷）[2-4]。二苯乙烯苷为何首乌中主要水溶性成分，有抗衰老、神经保护、抗血脂、抗动脉粥样硬化、抗

肿瘤及抗肿瘤转移作用[5-6]。EG有神经保护、促智、改善睡眠、促成骨细胞增殖分化、降血脂、抗菌抗病

毒和抗肿瘤等药理活性，具有重要研究和开发价值[7]。中药饮片标准汤剂可以标化不同的临床用药形

式，提高临床用药的准确性和剂量的一致性[8]。中药配方颗粒的生产工艺参数、质量控制方法和有效指标成分的选择等药学研究均须与标准汤剂进行对比，以保证与标准汤剂质量的一致性。本研究按照标准汤剂制备方法，选用首乌藤主产区的 15 批饮片制备标准汤剂，以二苯乙烯苷和EG为指标成分，测定其含量，计算转移率和出膏率范围，并进行特征图谱研究，为首乌藤饮片标准汤剂质量标准的制定提供基础数据，并为提高首乌藤配方颗粒的质量控制水平和规范其临床用药提供依据。

1 仪器与试药

ACQUITY UPLC H-Class 系统（PDA检测器），

美国沃特世公司；Empower3 色谱工作站，美国沃特

世公司；LC-15C 高效液相色谱仪（SPD-15C 型紫外

检测器、SIL-10AF 自动进样器、CTO-15C 柱温箱），

日本岛津公司；Pilot5-8L 真空冷冻干燥机，北京博医

康实验仪器有限公司；TB-215D、BSA224S-CW 电子

分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司；JY10001型电子天平，上海民桥精密科学仪器有限公司；

KQ-250 型超声波清洗器（功率250 W，频率 40 kHz），

昆山市超声仪器有限公司；RE-3000型旋转蒸发器，

上海亚荣生化仪器厂；BJH-W200F 型陶瓷自动中药煲（电源 220 V、50 Hz，功率 300 W，容量 2.0 L），

广东天际电器股份有限公司；DHG-9123A 型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司。

二苯乙烯苷对照品（批号MUST-16121311，纯度＞

98%），成都曼思特科技有限公司；EG对照品（批号

16110101 ，纯度≥ 98% ）、没食子酸对照品（批号

151009，纯度≥98%）、原儿茶酸对照品（批号 151123，

纯度≥98%），成都普菲德有限公司；甲醇、乙腈， Fisher 化学试剂公司；磷酸为色谱纯，水为超纯水，

其他试剂均为分析纯。15批不同产地首乌藤药材均由神威药业集团有限公司提供，经河北省药品检验研究院孙宝惠鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum

2 方法与结果

2.1 首乌藤饮片检测

按 2015年版《中华人民共和国药典》（一部）首

乌藤饮片项下有关规定进行检测。15批首乌藤饮片的

含水量为 5.06%～9.46%，总灰分为 5.52%～9.56%，浸出物为 12.9%～21.2%，二苯乙烯苷含量为 0.20%～

2.51%，均符合规定。

2.2 首乌藤标准汤剂制备称取首乌藤饮片 100.0 g，煎煮 2 次。一煎加水

1000 mL，浸泡30 min，武火煮沸，文火保持微沸30 min；二煎加水 800 mL，武火煮沸，文火保持微沸20 min。用 100目筛网趁热过滤，合并2次煎液，迅速水浴冷

却，50 ℃真空减压浓缩至约200 mL流浸膏，测定流浸膏的密度和pH 值，放入冰柜冷冻（-40 ℃）过夜，用冷冻干燥机干燥，即得标准汤剂干燥粉末，计算其出膏率及水分，结果见表 2。首乌藤饮片标准汤剂平

均出膏率为（8.69±2.41）%，以均值±3SD 规定出膏率范围，则出膏率范围为 1.46%～15.91%。

2.3指标成分含量测定

2.3.1色谱条件

色谱柱：Wondasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：A为 0.1%甲酸，B 为乙腈，梯度洗脱（0～

15 min，18%→30%B；15～30 min，30%→65%B；30～

31 min，65%→18%B；31～40 min，18%B）；流速：

1.0 mL/min；检测波长：271 nm；进样量：10 μL；柱

温：30 ℃。理论塔板数按二苯乙烯苷峰计算应不低于 2000。色谱图见图 1。

2.3.2对照品溶液的制备取二苯乙烯苷和EG对照品适量，精密称定，加乙醇溶液溶解并定容至刻度，配制成每1 mL 含二乙烯苷 500.0 —g、EG 11.4 —g的混合对照品溶液，得。

2.3.3 供试品溶液的制备取首乌藤标准汤剂冻干粉适量，约0.1 g，精密称定，置 25 mL锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，超声处理（功率 250 W，频率 35 kHz）10 min，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.3.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液 2、4、8、12、16、20 μL，

按“2.3.1”项下色谱条件测定。以二苯乙烯苷的进样量为横坐标，测定的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，二苯乙烯苷在 1.000～10.000 μg 范围内线性关系良好，回归方程为Y＝773 607X＋98 451，r＝

0.999 9；以 EG的进样量为横坐标，测定的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，EG在 0.022 8～

0.228 μg 范围内线性关系良好，回归方程为 Y＝

3 279 683.413 0X＋766.400，r＝0.999 8。

2.3.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样6次，二苯乙烯苷和EG峰面积 RSD分别为 0.21%、0.89%，表明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验精密称取首乌藤标准汤剂冻干粉约 0.1 g，按

“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件分别于 0、2、

4、8、12、18 h进样测定，二苯乙烯苷和EG峰面积RSD分别为 1.09%、1.09%，表明供试品溶液在 18 h内较稳定。

2.3.7 重复性试验精密称取首乌藤标准汤剂冻干粉 6 份，每份约

0.1 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件进样，计算得供试品溶液二苯乙烯苷和 EG 总含量 RSD＝

1.94%，表明本方法重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验取同一批首乌藤标准汤剂冻干粉 9 份，每份约

0.05 g，精密称定，分别精密加入相当于80%、100%、

120%的二苯乙烯苷和 EG对照品各3 份，按“2.3.3”

项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算得二苯乙烯苷和EG的平均回收率分别为

102.62%、101.47%，RSD 分别为 1.06%、2.03%，表明该方法准确度良好。

2.3.9 样品含量测定

按“2.3.1”项下色谱条件测定 15 批首乌藤标准汤剂和饮片中二苯乙烯苷和EG的含量，结果见表3。

以均值±3SD规定二苯乙烯苷和EG转移率范围，则二苯乙烯苷转移率为 3.94%～53.53%，EG 转移率为

2.53%～37.06%。

2.4 特征图谱建立与分析

2.4.1 色谱条件

色谱柱为 ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×

100 mm，1.7 μm）；流动相为 0.1%磷酸（A）-乙腈（B），

梯度洗脱（0～3 min，90%～87%A；3～6 min，85%～

80%A；6～8 min，80%～75%A；8～10 min，75%～

70%A；10～13 min，70%A；13～14 min，70%～65%A；

14～16 min，65%～60%A；16～17 min，60%～20%A；

17～18 min，20%～10%A；18～19 min，10%A；20～

25 min，90%A）；流速 0.3 mL/min；检测波长 271 nm；柱温 30 ℃；进样量1 μL。在此色谱条件下，各色谱峰与相邻峰的分离度良好，峰形对称。色谱图见图2。

2.4.2 对照品溶液的制备精密称取二苯乙烯苷、EG、没食子酸、原儿茶酸对照品适量，加稀乙醇稀释至浓度分别为 70.0、

26.0、30.0、36.0 —g/mL 的混合对照品溶液，摇匀，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备取首乌藤标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.1 g，精密称定，置25 mL锥形瓶中，加入稀乙醇25 mL，超声处理（功率 250 W，频率 35 kHz）10 min，放冷， 用稀乙醇补充减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.4.4方法学考察通过查阅文献并与对照品色谱图比对后，指认出

1、2、4、10 号峰分别为没食子酸、原儿茶酸、二苯乙烯苷、EG。其中，二苯乙烯苷峰分离度好、含量高、稳定，且 2015年版《中华人民共和国药典》（一部）首乌藤项下将其定为含量测定的指标成分，故选择该峰为参照峰（S），计算首乌藤标准汤剂指纹图谱主要特征峰的相对保留时间、相对峰面积RSD。

4.4.1 精密度试验

精密吸取同一份供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件连续进样6次，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积RSD 均小于3%，符合特征图谱要求，表明仪器精密度良好。

4.4.2 稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液，分别于制备后的0、

4、8、12、14 h注入色谱仪，记录各峰的峰面积。计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 RSD 均小于3%，表明供试品溶液在14 h内稳定。

4.4.3 重复性试验称取同一批样品各约 0.1 g，按“2.4.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录各峰的峰面积，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积RSD 均小于3%，表明该方法重复性良好。

2.4.5特征图谱的建立

分别制备15批首乌藤饮片标准汤剂供试品溶液，

按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，采用国家药典委

员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》 3 讨论在首乌藤饮片标准汤剂制备过程中发现，采用10倍加水量即可浸过药面2～5 cm，但由于首乌藤炮制方法为切段，而藤茎粗细不一，需将粗壮的藤茎切制成适宜的薄片，饮片才能被完全浸透。另外，首乌藤煎煮时不需特殊处理，故选择一煎时间为30 min，二煎时间缩短为20 min。试验中采用趁热过滤方式进行固液分离，减少有效成分的损失；趁热过滤后迅速冷却，以减少热敏成分的分解，同时采用低温减压浓缩、冷冻干燥方法保证标准汤剂质量的稳定，最大程度保证与传统汤剂的一致性。

中药饮片标准汤剂及配方颗粒的质量标准不同于以药材醇提液为主的质量标准。为使中药化学成分被最大限度地提取出来，提取方法多以高浓度乙醇或甲醇为溶媒。而标准汤剂的制备以水为溶媒，虽然限了脂溶性成分的溶出，煎煮过程也可能导致一些热稳定成分的降解，但更加符合传统的临床用药习，且中药的内在质量不是由1种或几种成分的功效定的，而是多组分作为一个整体发挥疗效，故应采用更适宜的方法评价其质量。

本研究表明，在首乌藤饮片标准汤剂制备过程中二苯乙烯苷的平均转移率为 28.73%，因此，仅以二苯乙烯苷作为其质量评价指标，难以完整反映首乌藤化学组分特征。中药指纹图谱技术具有整体性和模糊性，能够相对全面地反映中药中所含化学成分的种类与数量，已成为目前国际上公认的控制中药质量的评 软件对色谱图进行匹配，得到特征图谱，见图 3。共确定 14 个共有峰，根据色谱峰匹配结果进行相似度分析，15批首乌藤饮片标准汤剂与对照图谱的相似度均大于0.90，符合指纹图谱相似度要求。 价模式。本试验采用UPLC法建立首乌藤饮片标准汤剂的特征图谱，克服了单一成分信息量不足的缺点，可以更加全面可靠地控制首乌藤水煎制剂的质量，为首乌藤标准汤剂的质量评价和临床用药提供依据和多角度研究思路，同时对于首乌藤配方颗粒的生产、质量控制提供了切实可行的参考数据。

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（收稿日期：2018-06-12）

（修回日期：2018-07-06；编辑：陈静）