多指标综合评分法优选抗感胶囊提取工艺

朱广平，戴雨晨，刘顺，倪文澎

2019-03-15 -

朱广平1，戴雨晨2，刘顺 1，2，倪文澎 1

1.南京中医药大学附属医院，江苏南京 210029；2.南京中医药大学，江苏南京 210023

摘要：目的优化抗感胶囊提取工艺。方法采用单因素考察结合正交试验设计法，以方中金银花和连翘的有效成分绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷 A 的含量和浸膏得率为综合评分指标，考察溶剂用量、提取时间、提取次数3个因素对抗感胶囊水提工艺的影响，并进行验证试验。结果最优提取工艺为：加12倍量水，回流提取2次，每次提取 1.5 h。结论本研究优选的提取工艺简单、稳定可行，对抗感胶囊的生产工艺制定具有一定的指导意义。

关键词：抗感胶囊；绿原酸；木犀草苷；连翘酯苷A；综合评分法；提取工艺中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2019)03-0077-05 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.03.017 开放科学（资源服务）标识码（OSID）： Kanggan

抗感合剂为江苏省中医院院内制剂，由金银花、连翘等 12 味药组成，既有辛凉透邪清热之效，又有芳香辟秽解毒之功，可疏散风热、清利咽喉、清热解毒、宣肺止咳，用于风热感冒引起的发热、头痛、咳嗽、鼻塞、流涕、咽痛等，临床应用10余年疗效显著。但合剂在使用中存在携带不便、顺应性不好等问题。胶囊具有质量稳定、剂量准确、顺应性好且便于携带等优点，故将抗感合剂改剂型为胶囊。为了提高有效成分含量，本试验采用单因素与正交试验法，以绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷A含量及浸膏率为综合评价

基金项目：国家自然科学基金青年基金（81603310）；江苏省

中医院院级课题（Y17039）

通讯作者：倪文澎，E-mail：wenpengni@163.com

指标，采用综合评分法优化抗感胶囊提取工艺。1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪，含四元泵（G1311A）、

柱温箱（G1316A）、DAD 检测器（G1314A）、工作站（Chemstation）；Kromasil 100-5-C18 色谱柱（5 µm，

4.6 mm×250 mm，编号M05CLA25）；10 万分之一电

子分析天平（BP-211D 型，德国 Sartorius）；万分之

一电子天平（AX224ZH/E，美国 OHAUS Corp）；DW

调温电热器（2000 mL，上海平环燃烧设备工程技术

有限公司）；电热套（5000 mL，上海羌强仪器设备有

限公司）；KQ-1000E 型医用超声波清洗器（昆山市超

声仪器有限公司）；HH-4数显型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9123A，上海精宏实验设备有限公司）；移

液器（1000 µL，德国 Eppendorf）。

组方药物金银花、连翘、拳参、板蓝根、绵马贯众、升麻、薄荷、苦杏仁、荆芥、桔梗、川芎、甘草，均购自安徽井泉中药饮片有限公司，批号分别为

20170801、20171001、20170801、20170601、20171001、

20170801、20171001、20171001、20170801、20170601、

20170501、20170801。绿原酸（批号 Y24J7K16726）、

木犀草苷（批号 Y26A9H59973）、连翘酯苷 A（批号

Y04J8H39276）对照品，均购自上海源叶生物科技有

限公司，纯度均≥98%。乙腈、甲酸为色谱纯（科龙化工试剂厂），水为超纯水，其余试剂为分析纯。2 方法与结果

2.1 绿原酸含量测定

2.1.1 色谱条件

流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；检测波

长：327 nm；柱温：30 ℃，流速：1 mL/min[1]221。

2.1.2 对照品溶液的制备精密量取适量绿原酸对照品，用50%甲醇定容，制成浓度为 193.8 µg/mL对照品贮备液。精密量取上述贮备液1 mL 于 10 mL棕色瓶中，用50%甲醇定容，即得浓度为 19.38 µg/mL 的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备取 1/10处方量药物饮片，加水浸泡提取后过滤，滤液浓缩成 100 mL提取液，备用。取制备好的提取液 1 mL 于 50 mL棕色瓶中，超声15 min，用 50%甲

醇定容，0.45 µm滤膜过滤，即得。2.1.4 阴性对照溶液的制备精密吸取缺金银花和拳参的提取液 1 mL，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.1.5 专属性试验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.1.1”项下色谱条件测定，色谱图见图1。阴性对照色谱图中，在绿原酸相同保留时间处未见相关吸收峰，表明其对测定无干扰，方法专属性良好。2.1.6 线性关系考察

精密量取绿原酸对照品 10.24 mg，置于 5 mL 容

量瓶中，定容至刻度，取该对照品液及稀释2、4、6、8、10 倍的对照品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，进样对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程 Y＝25.032X＋1949， r＝0.999 7，绿原酸的线性范围为204.8～2048 µg/mL。2.1.7 金银花饮片中绿原酸含量测定精密称定金银花粉末（过 4 号筛），按“2.1.3”

项下方法制备，分别精密吸取“2.1.2”项下对照品溶

液与供试品溶液各10 µL，按“2.1.1”项下色谱条件

测定，得金银花饮片中绿原酸含量为 1.9%，符合药典规定（不得少于 1.5%）。2.2 木犀草苷含量测定

2.2.1 色谱条件流动相 A 为乙腈、B 为 0.5%冰醋酸溶液，梯度

洗脱（0～15 min，10%～20%A；15～30 min，20%A；

30～40 min，20%～30%A），检测波长为 350 nm，柱

温 30 ℃，流速1 mL/min[1]221。

2.2.2 对照品溶液的制备精密量取木犀草苷对照品适量，用 70%乙醇定

容，制成浓度为 201.2 µg/mL对照品贮备液。精密量

取上述对照品贮备液1 mL，置 10 mL棕色瓶中，用

70%乙醇定容，即得 21.02 µg/mL 对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备取 1/10处方量药物饮片，加水浸泡提取后过滤，滤液浓缩成 100 mL提取液，备用。取制备好的提取液 1 mL 于 50 mL容量瓶中，超声15 min，用 70%乙醇定容，0.45 µm滤膜过滤，即得。2.2.4 阴性对照溶液的制备精密吸取缺金银花的提取液 1 mL，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.5 专属性试验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件测定，色谱图见图2。阴性对照色谱图中，在木犀草苷保留时间处未见相关吸收峰，表明其对测定无干扰，方法专属性良好。2.2.6 线性关系考察精密量取木犀草苷对照品3.91 mg，置于 5 mL 容量瓶中，定容至刻度。取该对照品溶液及稀释20、40、60、80、100 倍的对照品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，进样对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程 Y＝32.244X－

109.17，r＝0.999 9，结果表明，木犀草苷的线性范围为 7.82～782 µg/mL。

2.2.7 金银花饮片中木犀草苷含量测定精密称定金银花粉末（过 4 号筛），按“2.2.3”

项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液与供试品溶液各10 µL，进样测定，得金银花饮片中木犀草苷含量为0.27%，符合药典规定（不得少于 0.050%）。

2.3 连翘酯苷A含量测定2.3.1 色谱条件

流动相：乙腈-0.4%冰醋酸（15∶85）；检测波长：

330 nm，柱温：30 ℃，流速：1 mL/min[1]170。

2.3.2 对照品溶液的制备精密量取连翘酯苷A对照品适量，用70%甲醇定容，制成 419.2 µg/mL对照品贮备液，精密量取对照品贮备液1 mL，置于 10 mL棕色瓶中，用70%甲醇定容，即得浓度为 41.29 µg/mL 的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备取 1/10处方量药物饮片，加水浸泡提取后过滤，滤液浓缩成 100 mL提取液，备用。取制备好的提取1 mL 于 50 mL容量瓶中，超声15 min，用 70%甲醇

定容，0.45 µm滤膜过滤，即得。2.3.4 阴性对照溶液的制备精密吸取缺连翘的提取液 1 mL，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3.5 专属性试验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液

适量，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，色谱图见图3。阴性对照色谱图中，在连翘酯苷A相同保留时间处未见相关吸收峰，表明其对测定无干扰，方法专属性良好。

2.3.6 线性关系考察精密量取连翘酯苷A对照品 12.045 mg，置 5 mL

容量瓶中，定容至刻度。取该对照品溶液和稀释2、4、6、8、10 倍的 6份对照品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，进样对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程 Y＝15.811X＋

424.48，r＝0.999 4，结果表明连翘酯苷 A 的线性范

围为 240.9～2409 µg/mL。

2.3.7 连翘饮片中连翘酯苷A含量测定

精密称定连翘粉末（过 5 号筛），按“2.3.3”项

下方法制备供试品溶液，分别精密吸取“2.3.2”项下对照品溶液与供试品溶液各10 µL，测定，得连翘饮片中连翘酯苷 A 含量为 4.2%，符合药典规定（不得

少于 0.25%）。2.4 浸膏率测定

精密吸取样品提取液 5 mL，置于已干燥至恒重

的蒸发皿中，在水浴上蒸干，置于105 ℃烘箱中，干燥至恒重，取出，移至干燥器内，冷却30 min，迅速精密称定质量。以干燥品计算供试品的浸膏得率。浸膏率（%）＝固含物质量（g）÷加入供试品溶液体

积（mL）×100%。2.5 单因素考察

2.5.1 溶剂用量在其他煎煮条件固定的情况下，分别加 6、10、15倍量水，按上述方法测定煎液中绿原酸的含量。结果显示，溶剂用量为 10 倍时，绿原酸含量最高；溶剂用量不足 10 倍量时，溶剂用量越少含量越低；溶剂用量高于 10 倍量时，溶剂用量越高含量越低。因此，综合单因素考察结果，选择8、10、12 倍量溶剂进行正交试验。

2.5.2 提取时间在其他煎煮条件固定的情况下，分别提取30、90、

150 min，按上述方法测定煎液中绿原酸的含量。结果显示，提取时间在90 min以内，提取时间越长，绿原酸含量越高；当提取时间为150 min时，绿原酸含量甚至低于提取30 min时。综合考虑单因素考察结果，选择正交试验提取时间为 60、90、120 min。2.6 正交试验优选提取工艺2.6.1 正交试验设计根据前期单因素考察结果，选择浸膏率、绿原酸含量、木犀草苷含量、连翘酯苷A含量为考察指标，以溶剂用量、提取时间、提取次数为试验因素，设计

L9（34）正交试验，筛选水提工艺条件。因素与水平见表1。2.6.2 正交试验及结果

根据“2.6.1”项下设计方案做正交试验，得9份

样品，按上述方法分别测定3个指标成分绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷A的含量。另取9份制备好的供试品，按“2.4”项下方法测定浸膏率。用多指标试验全概率法[2-3]进行数据处理，设 Bi为第 i 号试验，Aj为第 j 个指标，i＝1，2，3，…，n，

j＝1，2，3，…，k，且 A1，A2，A3，…，An 互不

相容，设各指标的重要程度之比为A1∶A2∶A3，…， Ar＝M1∶M2，…，Mr，则： P(Aj) = M୨ j = 1,2,3, … , k N （1）以 Xij 表示第 j 个指标下的第 i 个测定值，以 Sj j个指标下各次（n

表示第Sj = ∑Sj = ෍୬ X୧୨ i = 1,2,3,次）试验结果的和。即： … , n j = 1,2,3, … , k ୧ୀଵ （2）则P(Bଵ /A ଵ) = X୧ ∕ Sj ：

P(Bi)୨ୀଵ ୩ = ∑ܲ(ܣ݆)ܲ(ܤଓሶ⁄ܣ݅) i = 1,2,3, … , n （3）

（4）公式（4）即为同时兼顾各指标综合效应的全概率公式。以浸膏得率、绿原酸含量、木犀草苷含量和连翘酯苷A含量计算综合评分，并设定其权重系数分别为P(Bi) 30%、30%、30%和= P(Bi/A1) + P(Bi/A2) 10%，综合评分计算公式为： + P(Bi/A3) + P(Bi/A4) i = 1,2,3, … , n （5）试验安排及结果见表2，方差分析见表3。

由直观分析结果可知，以综合评分为考察指标，各因素的影响顺序为 B＞C＞A；由方差分析结果可知，各因素对提取工艺均无显著影响（P＞0.05）。结合直观分析和方差分析结果，同时根据生产节能、省时的实际需要，确定优选工艺为A3B2C2，即用 12 倍量的水提取2次，每次 1.5 h。

2.7 验证试验按抗感胶囊处方比例称取处方药物饮片3 份，按优选的提取工艺条件平行制备3份样品。按上述方法分别测定浸膏率、绿原酸含量、木犀草苷含量、连翘酯苷A含量，结果见表 4，RSD 分别为 1.14%、0.29%、1.63%、0.65%，表明优选出的抗感胶囊水提工艺稳定、可行。

3 讨论中药复方制剂成分多样，采用多指标进行综合评分可有效避免复方制剂质量不稳定等问题。相对于单一指标成分，多指标成分评价更能反映复方的整体

性、复杂性和有效性[4]。多指标综合评分法中权重系

数的赋予是综合评分是否科学合理的表现[5-6]。抗感胶囊方中君药为金银花和连翘。绿原酸为金银花的主要有效成分，故权重系数设为 0.3；木犀草苷含量次之，权重系数设为 0.1。连翘酯苷 A是连翘的主要成分，权重系数设为 0.3。中药浸膏质量的优劣对中药

制剂成型工艺及制剂成品的质量具有重要作用[7]，因此权重系数设为 0.3。验证试验表明，本研究优选出的抗感胶囊提取工艺条件比较合理。

本试验仅选取主要指标成分，未能全面研究复方中药味的成分。另外，寻找简便、准确的多指标含量测定方法亦可为本复方的开发利用奠定基础。参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科

技出版社,2015.

[2] 彭兰兰,王燕莉,杜锦文.用多指标试验全概率评分法研究乳癖康糖浆

提取工艺[J].深圳中西医结合杂志,2015,25(8)：171-173.

[3] 周琴妹,陈晓斌.用多指标试验全概率评分法研究敛疮液制备工艺[J].