电针对 SAMP8小鼠学习记忆与海马神经元NMDA 受体表达的影响

骆雍阳，蒋艺燕，杨文丹，赵恩聪，李斐斐，许茜，钱长晖，董卫国

骆雍阳1，蒋艺燕2，杨文丹1，赵恩聪1，李斐斐1，许茜2，钱长晖2，董卫国 2

1.福建中医药大学针灸学院，福建 福州 350122；

2.福建中医药大学中西医结合学院，福建 福州 350122

摘要：目的 观察电针“百会”“大椎”“肾俞”对SAMP8小鼠学习记忆与海马神经元NMDA受体 NR2A和 NR2B 表达的影响，探讨电针治疗阿尔茨海默病的机制。方法 6 月龄 SAMP8 小鼠 24 只，随机分为模型组和电针组，同龄正常老化 SAMR1 小鼠 12 只为对照组。电针组电针“百会”“大椎”“肾俞”30 d。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力，免疫组化染色和 Western blot 检测海马神经元 NR2A 和 NR2B的表达。结果 与对照组比较，模型组小鼠逃避潜伏期明显延长（P＜0.01)，原平台象限停留时间明显缩短（P＜0.01），

跨越原平台次数明显减少（P＜0.01），海马神经元NR2A 相对表达量明显升高（P＜0.01），NR2B 相对表达量

明显下降（P＜0.01）；与模型组比较，电针组小鼠逃避潜伏期明显缩短（P＜0.05），原平台象限停留时间明显

延长（P＜0.01），跨越原平台次数明显增加（P＜0.05），海马神经元 NR2A 相对表达量明显下降（P＜0.05），

NR2B 相对表达量明显升高（P＜0.01）。结论 电针能改善 SAMP8 小鼠的学习记忆能力，其作用机制可能与电针抑制海马神经元NMDA 受体 NR2A的表达和促进NMDA 受体 NR2B的表达有关。关键词：阿尔茨海默病；电针；NMDA受体；SAMP8 小鼠

中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2019)03-0051-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.03.012 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是以进行性认知功能障碍和记忆损害为主的中枢神经系统退行性疾病。其主要病理特征是细胞外β-淀粉样蛋白（amyloid β-protein，Aβ）沉积形成的老年斑、细胞内高度磷酸化 tau 蛋白形成的神经纤维缠结以及神经元和突触数量的减少。有研究报道，AD 早期可见突触功能障碍和突触丢失，提高突触可塑性能改善认知

[1-2]

功能障碍 。 N- 甲基 -D- 天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor，NMDAR）是一种离子通道型谷氨酸受体，在突触可塑性的调控中起非常

重要的作用，参与学习和记忆的产生和维持过程[3] 。这与 NMDA 受体的功能单位 N-甲基-D-天冬氨酸受体 2A（N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2A，

NR2A ）亚基和 N-甲基 -D-天冬氨酸受体 2B （N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B，NR2B）亚基密切相关。我们前期研究表明，电针治疗能改善快速老化模型小鼠亚系 SAMP8 小鼠学习记忆能力和

突触功能[4-6]。SAMP8 小鼠目前被认为是一种较为完善的AD 模型[7] ，已广泛应用于AD 的研究[8]。本实验通过电针 SAMP8 小鼠“百会”“大椎”“肾俞”，观察电针对SAMP8小鼠海马神经元NMDA受体NR2A和 NR2B表达的影响，探讨电针改善SAMP8 小鼠学习记忆能力的可能机制，为电针防治AD的临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

6月龄抗快速老化小鼠亚系SAMR1 小鼠 12 只，雄性，体质量 20～25 g，北京大学医学部实验动物中心提供，实验动物质量合格证号 SCXK （京）

2011-0012，设为对照组；6 月龄 SAMP8 小鼠 24 只，雄性，体质量 20～25 g，采用随机数字表法将其分为模型组和电针组，每组 12 只，北京维华阜康生物科技股份有限公司提供，实验动物质量合格证号SCXK

（京）2014-0004。饲养于福建中医药大学 SPF 级动物实验中心，实验前小鼠适应性喂养1个月，实验动物均在完全一致的生活环境和饮食条件下饲养，温度

（23±1）℃，相对湿度（55±15）%，12 h 光照，自由摄食饮水。实验过程严格按国际动物保护及使用指南进行。

1.2 主要试剂与仪器

兔多克隆抗体NR2A（批号 ab203197），Abcam；兔多克隆抗体NR2B（批号 21920-1-AP），Proteintech； β-actin（批号 20536-1-AP），Proteintech；生物素标记的羊抗兔 IgG、DAB试剂盒，福州迈新生物工程有限公司；特超敏 ECL 化学发光试剂盒，碧云天生物技术公司；Motic Med 6.0 数码医学图像分析系统， Bio-Rad 图像分析系统。G6805-Ⅰ电针治疗仪，青岛

鑫升实业有限公司；0.25 mm×15 mm华佗牌无菌针灸针，苏州医疗用品厂有限公司；Morris水迷宫系统，中国医学科学院药物研究所；电镜CCD 相机-图像采集分析系统，德国 Soft-Imaging-System 公司。

1.3 干预电针组采用自制网兜固定小鼠，选择“百会”“大

椎”“肾俞”进行电针治疗，参照《实验针灸学》[9]取穴、定位：“百会”位于小鼠顶骨的正中，“大椎”位于背部正中（第7颈椎与第1胸椎间），“肾俞”位于第 2腰椎下两旁。具体操作方法：“百会”向前斜刺 2 mm，“大椎”向下斜刺2～3 mm，“肾俞”稍向内斜刺3～4 mm，其中“大椎”“肾俞”加电针，“肾俞”双侧交替进行。进针后不进行手法刺激，连接电针治疗仪，连续波，频率2 Hz，电流强度以引起小鼠后肢肌肉轻微颤动而不嘶叫为宜。每日1次，每次20 min，8d为 1 个疗程，疗程间隔 2 d，进行下 1 个疗程，共 3个疗程。模型组和对照组不进行电针治疗，只进行与电针组相同方式、时间和程度的抓取和固定。

1.4 Morris 水迷宫实验

采用 Morris 水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力，包括有定位航行实验和空间探索实验。电针治疗结束后开始进行定位航行实验。将平台置于第三象限，没于水下1 cm，每日上、下午各训练4次，将小鼠分别从4个入水点（各象限池壁中点）面向桶壁放入水中，记录小鼠爬上平台所需时间，即逃避潜伏期，如果 90 s 内未找到平台则将其引至平台并在平台停留 10 s，记录逃避潜伏期为90 s，连续 5 d。第 6日撤