层次分析-熵权法联合星点设计-响应面法优选胆汁制陈皮炮制工艺及饮片色度与成分相关性分析

1，祝婧 1，姚东 2，陈泣1，王林艳2，谌瑞林 3

吴乙庚

1.江西中医药大学，江西 南昌 330004；2.靖江市中医院，江苏 靖江 214500；

3.华润江中制药集团有限责任公司，江西 南昌 330004

摘要：目的 研究胆汁制陈皮炮制的最佳工艺参数，明确饮片色度与主要成分之间的关系。方法 采用星点设计-响应面法，以辅料用量、蒸制时间、干燥时间、干燥温度为考察因素，以橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠含量及外观性状、醇浸出物含量为评价指标，采用层次分析-熵权法对各评价指标赋予相应权重，计算总评归一值，优选最佳炮制工艺；采用相关性分析和回归分析研究饮片色度与主要有效成分含量的相关性，构建色度-成分的回归方程。结果 胆汁制陈皮最佳炮制工艺为每100 g陈皮用20 g蛇胆汁浸渍完全后，蒸制15 min，45 ℃干燥162 min。饮片色度值L*、b*值与橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠4种成分含量均具有显著相关性，a*值仅与牛磺胆酸钠含量具有相关性；构建了L*、b*值与4种成分含量及a*值与牛磺胆酸钠含量的线性回归方程。结论 采用星点设计-响应面法优化的胆汁制陈皮炮制工艺具有合理性、可行性，饮片色度与成分含量具有显著相关性。关键词：胆汁制陈皮；炮制；星点设计-响应面法；层次分析-熵权法；色度；成分；相关性中图分类号：R283.3 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2024)05-0118-07 DOI：10.19879/j.cnki.1005-5304.202311094开放科学（资源服务）标识码（OSID）： Optimization of Concoction Process of Snake Bile Processed Citri Reticulatae Pericarpium by Hierarchical Analysis-Entropy Weight Method Coupled with Central Composite Design-Response Surface Methodology and Correlation Analysis of

Color and Composition of Decoction Pieces

WU Yigeng1, ZHU Jing1, YAO Dong2, CHEN Qi1, WANG Linyan2, CHEN Ruilin3

1. Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China;

2. Jingjiang Hospital of Traditional Chinese Medicine, Jingjiang 214500, China;

3. China Resources Jiangzhong Pharmaceutical Group Co. Ltd., Nanchang 330004, China

Abstract: Objective To study the optimum processing parameters of snake bile processed Citri Reticulatae Pericarpium; To clarify the relationship between the color of decoction pieces and the main effective components. Methods Taking the amount of auxiliary material usage, steaming time, drying time and drying temperature as the factors, the central composite design-response surface method experimental design was established. The contents of hesperidin, nobiletin, tangeretin and sodium taurocholate, appearance and alcohol extract were used as evaluation indexes. The analytic hierarchy process (AHP) combined with entropy weight method (EWM) was used to assign corresponding weights to the evaluation indexes, and the overall desirability (OD) was obtained to optimize the best processing technology. Correlation analysis and regression analysis were used to study the correlation between the chromaticity of decoction pieces and the content of main components, and the regression equation of chromaticitycomponent was constructed. Results The best processing technology of snake bile processed Citri Reticulatae基金项目：江苏省中医药科技发展计划项目（MS2021091）通讯作者：祝婧，E-mail：277836041@qq.com

Pericarpium was to soak 100 g dried Citri Reticulatae Pericarpium completely with 20 g snake bile, steamed for 15 min, and dried for 162 min at 45 ℃. The results of chromaticity-component correlation showed that the L* and b* values in chromaticity values were significantly correlated with the contents of hesperidin, nobiletin, tangeretin and sodium taurocholate, and the a* value was only correlated with sodium taurocholate. The linear regression equations between L*, b* values and the contents of four components and a* values and the content of sodium taurocholate were constructed. Conclusion The application of central composite design-response surface method in the optimization of the processing technology of snake bile dried Citri Reticulatae Pericarpium is reasonable and feasible. There is a significant correlation between color degree and component content.

Keywords: snake bile processed Citri Reticulatae Pericarpium; processing; central composite design-response surface methodology; analytical hierarchy process-entropy weight method; chromaticity; component; correlation

陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥成熟果皮，具有理气健脾、燥湿化痰

功效[1]。陈皮的炮制方法众多，首见于唐代《备急千金

要方》，此后历代本草均有记载，包括清炒法、焙制法、盐制法等20多种[2]。孟河医派是我国四大地方医学流派之一，其脉理精细、用药精当、中药饮片炮制

技术独特，临床疗效显著[3]。胆汁制陈皮为孟河医派“以药制药”炮制特色饮片之一，始载于《丁甘仁医案》[4]，长于治疗痰盛阻窍之证。由于胆汁制陈皮饮片

目前缺乏明确的炮制工艺及生产规范，亦无相应质量标准，导致无法实现工业化生产，限制了该饮片的推广应用。因此，本试验采用星点设计-响应面法（CCD-RSM）联合层次分析-熵权法（AHP-EWM）优选胆汁制陈皮炮制工艺，并对饮片色度与主要有效成分之间进行关联分析，以期在规范炮制工艺的基础上，通过多维评价方法优化饮片质量评价方法，促进孟河医派胆汁制陈皮特色饮片的开发、转化及应用。

1 仪器与试药

CP214电子天平，奥豪斯仪器（上海）有限公司； SQP型电子天平，赛多利斯科学仪器有限公司；GZX9076MBE电热鼓风干燥箱，上海博讯实业有限公司设备厂；DE-100g万能高速粉碎机，浙江红景天工贸有限公司；HH-6数显电子恒温水浴锅，常州国华电器有限公司；SHZ-DⅢ予华牌循环水真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司；Waters 2695高效液相色谱仪，美国Waters公司；SR-62精密比色计，深圳市艾迈斯电子有限公司；KQ-500E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

陈皮（批号200521），江西江中中药饮片有限公司；眼镜蛇蛇胆，黄山祈泰蛇业有限公司。对照品橙

≥98%）、川陈皮素皮苷（批号wkq22010509，纯度

≥98%

（批号 wkq22012809 ，纯度 ）、橘皮素（批号wkq21042202，纯度≥98%），四川省维克奇生物科技有

CHB201113，纯度≥98%），限公司；牛磺胆酸钠（批号成都克洛玛生物科技有限公司；无水乙醇、甲醇为分析纯，西陇科学股份有限公司；乙腈、甲醇、磷酸为色谱纯，美国ACS恩科化学公司；水为娃哈哈纯净水。2 方法与结果

2.1 炮制方法

蛇胆去除胆衣，取适量（陈皮质量的5%～25%）蛇胆汁，与陈皮搅拌均匀，浸渍完全后，蒸制10～ 30 min，放入40～60 ℃烘箱烘120～180 min，即得。2.2 有效成分含量测定

2.2.1 色谱条件橙皮苷、川陈皮素、橘皮素测定：采用Diamonsil

μm），流动相C18（2）色谱柱（250 mm×4.6 mm，5为乙腈（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脱（0～16 min， 20%～36%B； 16～20 min， 36%B； 20～25 min， 36%～40%B；25～45 min，40%～60%B；45～60 min， 60%～80%B），流速1.0 mL/min，柱温35 ℃，进样量

μL，检测波长分别为

10 283 nm（橙皮苷）、330 nm （川陈皮素、橘皮素）。牛磺胆酸钠测定：采用Diamonsil C18（2）色谱

μm），流动相为乙腈（A）-0.1%柱（250 mm×4.6 mm，5磷酸水（B），等度洗脱（30%A），流速1.0 mL/min，

μL，检测波长

柱温35 ℃，进样量10 203 nm。

2.2.2 对照品溶液制备

精密称取橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠对照品适量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，分别制成浓度为0.425、0.724、0.095、0.545 mg/mL的溶液，超声（500 W，400 kHz）5 min，即得，于4 ℃冰箱保存备用。

2.2.3 供试品溶液制备

精密称取胆汁制陈皮粉末（过三号筛）1.0 g，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，密塞，超声（500 W，40 kHz）45 min，甲醇定容，摇匀，过滤，

用0.22 µm微孔滤膜过滤，即得，于4℃冰箱保存。2.2.4 方法学考察

2.2.4.1 线性关系考察

按“2.2.2”项下方法，制备橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠浓度分别为0.425、0.724、0.095、0.545 mg/mL的溶液。按“2.2.1”项下色谱条件进样，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，结果见表1。各成分在相应范围内线性关系良好。

表1 4种成分线性关系考察结果

2.2.4.2 精密度试验取“2.2.3”项下供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠峰面积，RSD分别为2.28%、2.62%、2.49%、2.01%，均小于3%，表明仪器精密度良好。2.2.4.3 稳定性试验取“2.2.3”项下供试品溶液，分别于24、32、48 h测定，记录橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠峰面积， RSD 分别为 1.94%、2.74%、2.38%、2.37%，表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.2.4.4 重复性试验精密称取胆汁制陈皮样品粉末6份，按“2.2.3”项下方法制备，分别测定并记录橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠的峰面积， RSD分别为2.51%、2.90%、2.36%、2.67%，表明方法重复性良好。

2.2.4.5 加样回收率试验

精密称取胆汁制陈皮样品粉末6份，分别置于6个容量瓶中，精密加入橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、牛磺胆酸钠对照品适量，按“2.2.3”项下方法制备，按

“2.2.1 ”项下色谱条件测定，平均回收率分别为

95.02%、 96.75%、 97.47%、 92.62%， RSD 分别为

2.49%、1.88%、1.97%、2.24%。

2.3 醇浸出物含量测定

精密称定胆汁制陈皮饮片约2.0 g （W0），置于

150 mL锥形瓶中，精密加入50%乙醇溶液25 mL，密

塞超声（500 W，40 kHz）40 min，迅速过滤，取续滤

液10 mL，置于已恒重的蒸发皿（W1）中，水浴蒸干，

于105 ℃烘箱中干燥3h，放入干燥器中冷却30 min，迅速称定质量（W2），计算醇溶性浸出物含量。醇溶性浸

出物含量（%）=（W2-W1）/（W0×10/25）×100%。2.4 外观性状分析

为避免传统打分法的主观局限性，采用色差仪对生品及30组炮制品的颜色进行测定，为样品的色差提供量化参数。取样品粉末约2g，均匀平铺于测色皿中，测定颜色，记录各组样品的L*、a*、b*值，每组样品平行测定3次，取平均值，胆汁制陈皮以色陈者为佳，

因此以ΔE= （ΔL*2+ Δ a*2+ Δ b *2 ）0.5为外观性状评判标准。L*表示亮度即黑色至白色的范围，a*表示红色至绿色的范围，b*表示黄色至蓝色的范围。经考察，L*、

a*、b*的精密度、重复性、稳定性RSD均小于3%，表

明精密度、重复性及稳定性良好。

2.5 指标成分权重层次分析法为主观赋权法，通过评价指标之间的

先后层次，得出各指标的权重；熵权法为客观赋权法，

通过对指标数据离散程度的评价确定权重。本研究将二者有机结合，以实现科学赋权[5-6]。

2.5.1 层次分析法赋权

参考相关文献[1，7]确定6个评价指标的重要程度

为：橙皮苷含量>川陈皮素含量=橘皮素含量=牛磺胆酸

钠含量>醇浸出物含量=外观性状。依据AHP计算方ωA

法 得到各指标的层次分析法权重（ ），见表2。一致

性比率（CR）=0.002 193 353，CR<0.1表示矩阵符合

一致性检验，各指标权重比例具有科学性。2.5.2 熵权法赋权通过公式（1）（2）对胆汁制陈皮工艺优化试验原始数据进行标准化处理并平移，根据公式（3）（4）（5）计算各指标的熵权法权重（ω ），橙皮苷、川陈皮素、E ωE橘皮素、牛磺胆酸钠、醇浸出物、外观性状的 分别为 0.198 833 154、 0.197 296 824、 0.193 933 862、0.198 352 010、0.076 658 396、0.134 925 755。标准化（Y）=（Xij-Min）（/ Max-Min） （1）平移（Z）=Y+0.01 （2）

/∑Zij n

= （3）

Pij Zn

=1 i

∑

= -1 ln × ln × ln （4） n Pij Pij

Ej l

= 1 i