金樱子不同炮制饮片化学成分及抗氧化活性分析

邓翀，江迎春，张化为，宋小妹，姜祎，颜永刚

陕西中医药大学药学院，陕西 咸阳 712046

摘要：目的 考察蜜制和麸制对金樱子化学成分的影响。方法 以总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸为评价指标，考察金樱子生品、蜜制品、麸制品中4类化学成分的变化情况；以体外对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率为评价指标，比较金樱子生品、蜜制品、麸制品的抗氧化活性。结果 金樱子生品、蜜制品、麸制品总皂苷含量分别为 3.332%、4.880%、4.572%，总酚酸含量分别为 1.92%、6.38%、7.30%，总多糖含量分别为 35.99%、40.38%、36.86%，总氨基酸含量分别 0.67%、0.76%、0.96%。经炮制后金樱子总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸含量均升高，其中总多酚含量升高最为明显；金樱子生品、蜜制品、麸制品体外清除 DPPH 自由基的 IC50分别为 0.47、0.51、0.22 mg。结论 与生品比较，金樱子蜜制品和麸制品化学部位含量增高，抗氧化性增强。

关键词：金樱子；蜜制；麸制；化学部位；抗氧化

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.018中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2017)04-0071-04 Analysis on Chemical Compositions and Antioxidant Activity of Different Processing

Decoction Pieces of Rosae Laevigatae Fructus DENG Chong, JIANG Ying-chun, ZHANG Hua-wei, SONG Xiao-mei, JIANG Yi, YAN Yong-gang (College of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China)

Abstract: Objective To investigate the honey and bran of processing for chemical compositions of Rosae Laevigatae Fructus. Methods With total polyphenols, total saponins, total polysaccharides and amino acids as the evaluation indexes, changes of the chemical compositions of these four chemical components in Raw product, honey products, bran products of Rosae Laevigatae Fructus were studied; in vitro activity of DPPH radical clearance for evaluation index, antioxidant activity of raw products, honey products, bran products of Rosae Laevigatae Fructus were compared. Results Raw products, honey products, and bran products of total saponin content were 3.332%,

4.880%, and 4.572%; total phenolic contents were 1.92%, 6.38%, and 7.30%; total polysaccharide contents were

35.99%, 40.38%, and 36.86%; the total amino acid contents were 0.67%, 0.76%, and 0.96%. Total polyphenol, total saponins, total polysaccharides, and total amino acids of Rosae Laevigatae Fructus after processing increased, in which the total polyphenol was most obvious; DPPH radical scavenging IC50 of raw products, honey products, and bran products were 0.47, 0.51, and 0.22 mg, respectively. Conclusion Compared with raw product, the content of chemical fractions in honey products and bran products of Rosae Laevigatae Fructus increase, and oxidation resistance is enhanced.

Key words: Rosae Laevigatae Fructus; honey; bran; chemical fractions; antioxidant

金樱子为蔷薇科蔷薇属植物金樱子Rosa laevigata Michx.的成熟果实，具有固精缩尿、涩肠止泻功效，用于治疗遗精滑精、遗尿尿频、崩漏带下、久泻久痢。金樱子的化学成分主要为三萜、有机酸、黄酮、鞣质、多糖等，具有提高机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗病毒等药理活性[1]。炮制引起中药饮片变化主 基金项目：国家自然科学基金（81374028） 要包括两方面：一是整体化学成分变化，二是化学成分变化导致生物活性的改变。目前主要以几个单体化学成分含量变化或某一两个化学部位含量为标准评价炮制品质量，无法合理阐释中药炮制变化的内涵。本研究从整体化学成分角度出发，在前期研究[2]基础上，以总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸为化学评价指标，以抗氧化为生物活性评价指标，研究金樱子不同炮制品的变化，为探讨其炮制原理提供参考。

1 仪器与试药

UV-1102紫外分光光度计（上海天美科学仪器有

限公司），GB204型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公

司，十万分之一），HH-2型数显恒温水浴锅（常州国

华电器有限公司），101型电热鼓风干燥箱（北京科伟

永盛实验仪器设备厂），SQ8200HD 型超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）。

金樱子药材购于西安市万寿路药材市场，经本院王继涛高级实验师鉴定为蔷薇科植物金樱子 Rosa laevigata Michx.的干燥成熟果实；没食子酸对照品、齐墩果酸对照品、芦丁对照品、D-葡萄糖对照品、L谷氨酸对照品（批号分别为 110831-200252、125742201058、0080-9705、110833-200503、070112，含量均为 98%），中国食品药品检定研究院；1,1-二苯基-2三硝基苯肼（DPPH，批号 CR0032），日本东京化成工业株式社；维生素 C 对照品（批号 2010608），天津市天力化学试剂有限公司；所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法和结果 2.1 不同炮制品的制备

2.1.1 麸制金樱子饮片 取金樱子生品饮片100 g，加麸量为 20 g，以 160 ℃温度炒制12 min，分离金樱子饮片与辅料，收集金樱子麸制饮片。

2.1.2 蜜制金樱子饮片 取金樱子生品饮片100 g，加蜜量为 25 g，闷润 3 h，以 160 ℃温度炒制10 min，收集金樱子麸制饮片。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒重的D-葡萄糖、L-谷氨酸、没食子酸、齐墩果酸对照品 15.50、7.50、10.00、9.90 mg，分别以适当的溶剂溶解，并分别配成 0.62、0.75、0.20、0.99 mg/mL 的对照品溶液。

精密称取 DPPH 约 10 mg，用70%乙醇溶解并定容于 25 mL棕色量瓶中，置于4 ℃冰箱备用。

2.2.2 供试品溶液的制备 ①精密称取各供试品饮片粉末约1g，以 13 倍量65%乙醇回流提取 2 次，每次 2 h，合并滤液并浓缩挥干，以65%乙醇溶解并定容至 25 mL 容量瓶中，4 ℃保存，供总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸及清除DPPH测定。②精密称取各供试品饮片粉末约0.5 g，加 10倍量无水乙醇，在微沸状态下回流提取2h，提取液减压回收乙醇后弃去，滤渣精密加20倍量水，煎煮2次，每次1 h，合并提取液，定容于25 mL 容量瓶，4 ℃保存，供多糖含量测定。

2.3 化学部位含量测定

2.3.1 线性关系考察 精密量取齐墩果酸对照品溶液 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，置于 10 mL 试

管中，70 ℃水浴挥干溶剂，加入 5%香草醛-冰乙酸

溶液（临用新配）200 µL及高氯酸溶液 800 µL，混

匀，60 ℃恒温水浴加热20 min，取出，立即于冰水中冷却 10 min 后加入5 mL冰乙酸，混匀，以不加样为空白，在 545 nm处测吸光度[3]。以对照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程 Y＝0.962 5X－

0.037 3，r2＝0.999 8，表明齐墩果酸在 0.198～0.693 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密量取没食子酸对照品溶液 50、100、150、200、

250、300 µL 于 10 mL具塞试管中，加乙醇至2 mL，加 0.3%十二烷基磺酸钠 0.8 mL 、 0.6%FeCl30.9%K3[Fe(CN)6]（1∶1）混合溶液0.4 mL，摇匀，放置 5 min，加 0.1 mol/L盐酸至刻度，摇匀，避光放置 20 min，以不加样为空白，于 744 nm 处测定[4]。以对照品溶液质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程 Y＝10.974X－0.002 6，r2＝1，表明没食子酸在0.01～0.06 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密量取L-谷氨酸对照品溶液 40、60、80、100、

120、140 µL 于 10 mL具塞试管中，各加水至1 mL，

加磷酸盐缓冲液（pH＝6.86）3 mL，加2%茚三酮溶液 1 mL，摇匀，沸水浴20 min，流水冷却，以不加样为空白，在 570 nm处测定[5]。以对照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程 Y＝8.903 8X－

0.104 6，r2＝0.999，表明 L-氨基酸在 0.030～0.105 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

精密量取D-葡萄糖对照品溶液 0.05、0.08、0.10、

0.15、0.20 mL于10 mL具塞刻度试管中，加水至2 mL，加5%苯酚溶液（现用现配）1 mL，混匀，迅速加入

5 mL 浓硫酸，40 ℃水浴 15 min，取出，冰水浴冷却

5 min，以水为空白，于 480 nm 处测其吸光度[6]。以对照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程

Y＝5.959 6X－0.005 5，r2＝1，表明D-葡萄糖在0.031～

0.124 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.3.2 方法学考察 按“2.2.2”项下方法，以没食子酸、齐墩果酸、D-葡萄糖、L-谷氨酸对照品为指标，考察总多酚、总皂苷、总多糖、总氨基酸的方法精密度、稳定性、重复性及加样回收率。结果表明，测定总多酚的方法精密度、稳定性、重复性 RSD 依次为

0.08%、0.26%、0.25%，平均回收率为100.8%±1.97 %；测定总皂苷的方法精密度、稳定性、重复性 RSD 依次为 0.13%、0.67%、0.24%，平均回收率为 101.6%±

1.32 %；测定总多糖的方法精密度、稳定性、重复性RSD 依次为 0.36%、0.33%、1.93%，平均回收率为

97.65%±1.63%；测定总氨基酸的方法精密度、稳定性、重复性RSD 依次为 0.65%、1.37 %、1.88 %，平均回收率为 100.43%±1.02%。各指标测定方法学考察均符合要求。

2.3.3 样品含量测定 精密量取各供试品溶液适量于 10 mL具塞试管中，按“2.3.1”项下测定各化学部位含量方法操作，平行测定3次，测其吸光度，计算各化学部位含量，结果见表 1～表 4。可知 4 类化学成分含量炮制品均高于生品，其中总酚酸含量变化最为明显。

2.4 抗氧化活性测定

精密移取不同体积供试品溶液于10 mL试管中，各加 DPPH 乙醇溶液 0.5 mL，混合液用70%乙醇定容至 5 mL，混匀，于室温暗处反应1 h，以乙醇为空白，在 522 nm处测吸光度（A1），并测定 DPPH 乙醇溶液

0.5 mL定容至5 mL后的吸光度（A0）及不同体积溶

液定容后的吸光度（A2），计算 DPPH自由基清除率。

清除率（%）＝[1－（A1－A2）/A0]×100%[7]。结果见图1。计算可得维生素C及金樱子生品、蜜制品、麸制品清除DPPH 自由基的 IC50依次为 0.02、0.51、

0.47、0.22 mg。

3 讨论

金樱子三萜类化学成分主要为五环三萜皂苷

类[8]，本研究结果表明，生品、蜜制品及麸制品中皂苷类化学成分含量依次为 3.33%、4.88%、4.57%；加辅料炮制后皂苷含量变化的原因可能是辅料的引入及加热过程对金樱子组织细胞结构的影响，从而增强了皂苷类化学成分的溶出率。金樱子总多酚类主要包

括黄酮类及鞣质类化学成分[9]，本研究结果显示，生品、蜜制品及麸制品中总多酚含量依次为 1.92%、

6.38%、7.30%，这可能与炮制加热过程使部分鞣质类

发生水解，以及辅料麸皮含有的大量多酚类成分[10]在炮制过程中吸附或吸收于药材组织中有关。金樱子

生品、蜜制品及麸制品中总多糖含量依次为35.99%、

40.38%、36.86%，与文献报道的多糖变化趋势基本吻

合[11]；蜜制品多糖含量变化较大的原因可能与炮制辅料蜂蜜中含有 80%～90%糖类化学成分有关[12]。金樱子生品、蜜制品及麸制品中总氨基酸含量依次为

0.67%、0.76%、0.96%，炮制品总氨基酸含量高于生品原因可能与炮制辅料蜂蜜或麸皮中含有大量氨基酸和蛋白质有关。

从体外抗氧化活性评价结果来看，金樱子生品、蜜制品及麸制品清除 DPPH 自由基的 IC50 依次为

0.51、0.47、0.22 mg。从化学成分变化趋势来看，金樱子抗氧化活性与总多酚和总氨基酸含量变化趋势一致，这说明金樱子抗氧化活性可能与多酚类，或多酚和氨基酸类含量相关。

综上所述，金樱子炮制过程使其主要化学成分皂苷类、多酚类、多糖及氨基酸类的含量发生变化，其体外抗氧化活性也相应发生变化。目前对金樱子炮制后化学成分变化的研究主要集中在多糖和黄酮，而对皂苷、总多酚、氨基酸含量变化鲜有报道，今后需进一步关注。另外，还应结合药效评价分析化学成分变化与药效变化的关联性，从而揭示金樱子炮制原理。

参考文献：

[1] 高品一.金樱子的化学成分研究[D].沈阳：沈阳药科大学,2008.

[2] 江迎春,邓翀,李景丽.金樱子不同炮制品化学成分差异分析[J].现代

中医药,2015,35(6)：95-96.

[3] 周惠卿,余澄清,陈冰冰.正交设计法优选岗梅中总皂苷的提取工艺研

究[J].海峡药学,2016,28(4)：74-77.

[4] 文冰杰,夏厚林,李瑞煜,等.UV 法测定叠鞘石斛中总酚含量方法研究[J].

辽宁中医药大学学报,2016,18(1)：44-46.

[5] 王斌,张腾霄,宋相周,等.不同产地板蓝根中多糖及总氨基酸含量的

分析比较[J].南方农业学报,2014,45(1)：23-27.

[6] 李小宁,于欢,龚千锋,等.柴胡总多糖提取工艺优化及其不同炮制品

中总多糖的含量比较[J].中国实验方剂学杂志,2016,22(14)：46-49.

[7] 李生茂,刘琳,彭璐,等.益智仁 HPLC 指纹图谱与其抗氧化活性[J].中

成药,2016,38(6)：1319-1324.

[8] 高品一.金樱子的化学成分研究[D].沈阳：沈阳药科大学,2008.

[9] 刘学贵,李佳骆,高品一,等.药食两用金樱子的研究进展[J].食品科

学,2013,34(11)：392-398.

[10] 边媛媛.小麦麸皮多酚化合物抗氧化活性研究[D].无锡：江南大学,

2015.

[11] 杨梓懿,刘文山,郭锦明,等.不同炮制方法对金樱子成分的影响[J].

中华中医药杂志,2008,25(增刊)：233-235.

[12] 顾雪竹,李先端,钟银燕,等.蜂蜜的现代研究及应用[J].中国实验方

剂学杂志,2007,13(6)：70-72.

（收稿日期：2016-08-08）

（修回日期：2016-08-28；编辑：陈静）