牛樟芝和沉水樟芝的物种同源性及质量控制研究

王宏运1，王宫 2，喻琳 1，褚克丹 1，徐伟 1，李煌 1

1.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；2.福建省中医药研究院，福建 福州 350003摘要：目的 比较研究牛樟芝和沉水樟芝药材间的物种同源性，进行质量控制研究。方法 建立牛樟芝和沉水樟芝药材的HPLC指纹图谱，采用 Diamonsil C18（2）色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm），乙腈-1%甲酸水为流动相梯度洗脱，流速 0.8 mL/min，检测波长 254 nm，柱温 30 ℃。结果 牛樟芝和沉水樟芝的 HPLC指纹图谱中标定了9 个共有峰，11批牛樟芝相似度在 0.906～0.995 之间，10批沉水樟芝相似度在 0.956～0.998之间。结论 本法简便、重复性好，牛樟芝和沉水樟芝的HPLC指纹图谱和红外光谱具有一定相似性。关键词：牛樟芝；指纹图谱；高效液相色谱法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.08.019

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2017)08-0085-04 Study on Species Homology and Quality Control of Two Kinds of Antrodia Cinnamomea WANG Hong-yun1, WANG Gong2, YU Lin1, CHU Ke-dan1, XU Wei1, LI Huang1 (1. College of Pharmacy, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China; 2. Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003, China)

Abstract: Objective To compare and study species homology of two kinds of Antrodia Cinnamomea; To conduct the study on quality control. Methods HPLC fingerprint of two kinds of Antrodia Cinnamomea was applied. The HPLC fingerprints were determined on an Diamonsil C18 (2) column (250 mm × 4.6 mm, 5 µm) eluted with the mobile phase consisting of 1% formic acid solution and acetonitrile in gradient mode at a flow rate of 0.8 mL/min; the detection wavelength was set at 254 nm; the column temperature was 30 ℃. Results There were 9 common peaks in the HPLC fingerprints of Antrodia Cinnamomea. The similarities varied from 0.906 to 0.995 and from 0.956 to 0.998 in 11 batches and 10 batches of two kinds of Antrodia Cinnamomea, respectively. Conclusion The method is simple and with good reproducibility, which shows that the HPLC fingerprint and infrared spectrum share similarity for two kindsof Antrodia Cinnamomea.

Key words: Antrodia Cinnamomea; fingerprint; HPLC

牛樟芝 Antrodia Cinnamomea 又名樟芝、樟菇等，属于多孔菌科，寄生于牛樟树 Cinnamomum kanehirae hayata的腐朽内壁。其产于我国台湾省，是一种珍贵的药用真菌。《中国药用真菌图志》记载，牛樟芝具

有抑肿瘤、抗氧化、消炎等功效[1]。研究表明，牛樟

芝主要含三萜、多糖、腺苷等成分[2]，具有降糖[3]、

保肝[4-5]、缓解疲劳[6]等功效。但自然界中牛樟树被大量砍伐，以至濒临绝种，被列为台湾保育类树种，且野生牛樟芝对生长环境要求苛刻，生长速度缓慢，因而产量较低。近年来有人工培育牛樟芝技术的出现，其中段木培养法所得产物与野生牛樟芝成分最为相

似[2，7-9]，但段木栽培法也会受到其寄主牛樟树资源数 基金项目：福建省战略性新兴产业发展专项（2013年）通讯作者：徐伟，E-mail：xwfjtcm@sina.com 量的限制。沉水樟芝是选择沉水樟 Cinnamomum micranthum作为樟芝的新宿主，经人工培育得到。沉水樟主要分布于我国台湾、福建、广东、广西、湖南、江西及越南北部等地，资源数量相对比较丰富。本研究运用HPLC指纹图谱和红外光谱分析牛樟芝与沉水樟芝的相似性，探讨二者物种的同源性，并进行质量控制。

1 仪器与试药

Ultimate 3000 高效液相色谱仪，Thermo Fisher Scientific；Diamonsil C18（2）色谱柱（250 mm×4.6 mm，

5 µm），DIKMA 公司；电子分析天平，METTLER

TOLEDO；KQ-500DE 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；冷冻干燥机，CHRIST；傅里叶变换红外光谱仪，Thermo Fisher Scientific。

乙腈、甲酸均为色谱纯。牛樟芝和沉水樟芝样品

来源信息见表 1，经福建省中医药研究院王宫副研究员鉴定为多孔菌科牛樟芝 Antrodia Cinnamomea 和沉水樟芝 Antrodia Cinnamomea 的干燥子实体，样品保存在福建中医药大学中药检定中心。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18（2）色谱柱（250 mm×

4.6 mm，5 —m）；检测波长：254 nm；流速：0.8 mL/min；

柱温：30 ℃；进样浓度：20 mg/mL；进样量：10 μL；

采集时间：80 min；流动相为乙腈-1%甲酸水，梯度洗脱程序见表2。

2.2 供试品溶液的制备

取牛樟芝样品粉末约0.6 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入95%乙醇 9 mL，超声提取 40 min（功率 500 W，频率 40 kHz），过滤，滤渣再加 95%乙醇 9 mL，同法提取2次，合并滤液，置于60 ℃水浴锅内挥干溶剂，残渣用95%乙醇溶解，转移至 10 mL 容量瓶中，加95%乙醇至刻度，摇匀，取1 mL定容后的溶液，加入95%乙醇 2 mL，0.22 μm微孔滤膜过滤，即得。同法制备沉水樟芝供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验 分别取同一批牛樟芝（N1）和

沉水樟芝（C1）的供试品溶液，按“2.1”项下条件连续进样6次，检测特征指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD均小于3.0%，符合指纹图谱技术要求。

2.3.2 稳定性试验 分别取同一批牛樟芝（N1）和

沉水樟芝（C1）的供试品溶液，按“2.1”项下条件，分别在 0、2、4、8、12、24 h检测特征指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD均小于3.0%，说明供试品溶液在 24 h 内稳定。

2.3.3 重复性试验 分别取同一批牛樟芝（N1）和

沉水樟芝（C1）样品，按“2.2”项下方法操作，制备 6份供试品溶液，按“2.1”项下条件进样，检测特征指纹图谱。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD均小于3.0%，符合要求。

2.4 样品测定

分别将11批牛樟芝样品和10批沉水樟芝样品按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件依次进样检测，记录色谱图，见图1、图 2。