超高液相色谱法同时测定通宣理肺丸中白花前胡甲素和白花前胡乙素

CJI (Traditional Chinese Medicine) - - 目次 -

陈少萍1,王丽丽2,梁艺坚 3

1.广西壮族自治区妇幼保健院,广西 南宁 530003;2.桂林市食品药品检验所,广西 桂林 541012;

3.广西梧州三鹤药业股份有限公司,广西 梧州 543002

摘要:目的 建立通宣理肺丸中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量测定方法。方法 采用超高液相色谱法,色谱柱为 ACE UItraCore SuperC18(75 mm×2.1 mm,2.5 —m),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为

0.3 mL/min,检测波长为 321 nm,柱温为 40 ℃。结果 白花前胡甲素、白花前胡乙素分别在 20.48~204.8 ng

(r=0.999 7)、5.158~51.58 ng(r=1.000 0)范围内呈良好线性关系,加样回收率分别为 98.2%、100.3%。结论 该方法简便、快速、准确、重复性好,可用于通宣理肺丸中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量测定。关键词:白花前胡甲素;白花前胡乙素;通宣理肺丸;超高液相色谱法

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2018.09.018

中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2018)09-0076-03

Simultaneous Determination of Praeruptorion A and Praeruptorion B in Tongxuan Lifei Pills by UPLC

CHEN Shao-ping1, WANG Li-li2, LIANG Yi-jian3

1. The Maternal & Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530003, China;

2. Guilin Institute for Food and Drug Control, Guilin 541012, China;

3. Three Crane Pharmaceutical Co.,Ltd. of Guangxi Wuzhou, Wuzhou 543002, China

Abstract: Objective To establish a method for content determination of praeruptorin A and praeruptorin B in Tongxuan Lifei Pills. Methods UPLC method was adopted. ACE UItraCore SuperC18 (75 mm × 2.1 mm, 2.5 μm) was used with methanol-water as the mobile phase, by gradient elute. The flow rate was 0.3 mL/min; The detection wavelength was set at 321 nm; The column temperature was 40 ℃. Results Praeruptorin A and praeruptorin B showed the good linear relationship in the range of 20.48–204.8 ng (r=0.999 7) and 5.158–51.58 ng (r=1.000 0), respectively. The average recoveries were 98.2% and 100.3%, respectively. Conclusion The method is simple, fast, accurate and reproducible, which can be used to determine the contents of praeruptorin A and praeruptorin B in Tongxuan Lifei Pills.

Keywords: praeruptorin A; praeruptorin B; Tongxuan Lifei Pills; UPLC

通宣理肺丸由紫苏叶、前胡、桔梗等 11 味药组成,具有解表散寒、宣肺止嗽功效,用于风寒束表、肺气不宣所致感冒咳嗽,症见发热、恶寒、咳嗽、鼻

塞流涕、头痛、无汗、肢体酸痛[1]1452。前胡为方中臣药,具降气化痰、散风清热之功效,用于痰热喘满咯

痰黄稠、风热咳嗽痰多[1]265。前胡的主要成分为香豆素类化合物,白花前胡甲素和白花前胡乙素是前胡的

基金项目:全国中药特色技术传承人才培训项目

(J20164811007)

通讯作者:王丽丽,E-mail:583313176@qq.com 有效成分。已有文献报道通宣理肺丸中陈皮、枳壳、

黄芩、苦杏仁、甘草等含量测定方法[2-7],而对方中

前胡的测定尚无报道。2015年版《中华人民共和国药典》前胡的含量测定采用三氯甲烷提取白花前胡甲素和白花前胡乙素,而三氯甲烷毒性较大,在新版药典中逐步采用其他溶剂替换。本研究建立甲醇提取、中性氧化铝柱净化测定通宣理肺丸中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量的方法,以提升通宣理肺丸的质量标准,改进该制剂的质量控制方法。仪器与试药

Agilent 1290 高效液相色谱仪(美国安捷伦公

司),KM-1990QFY 智能型液晶数控型超声波清洗机

(威固特新型设备有限公司),GR-202电子分析天平(日本A&D 公司)。

白花前胡甲素对照品(批号 111711-200602,质量分数 100%)、白花前胡乙素对照品(批号 111904

201102,质量分数 98.8%),中国食品药品检定研究院;通宣理肺丸(批号 151102、161101、161102),广西梧州三鹤药业股份有限公司;中性氧化铝(批号

20140401),江苏强盛功能化学股份有限公司;甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件与系统适用性试验

采用 ACE UItraCore SuperC18 色谱柱(75 mm×

2.1 mm,2.5 —m),流动相为甲醇-水,梯度洗脱(0~

5 min,40%~60%甲醇;5~5.3 min,60%甲醇;5.3~

6 min,60%~70%甲醇),流速 0.3 mL/min,检测波长 321 nm,柱温 40 ℃,进样量2 —L。

分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液,注入液相色谱仪,理论塔板数以白花前胡甲素计不低于5000,白花前胡甲素和白花前胡乙素与其他组分色谱峰分离度均大于 1.5,阴性对照不干扰样品测定。色谱图见图1。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备分别精密称取白花前胡甲素、白花前胡乙素对照品适量,加甲醇溶解并定容,制成浓度分别为2.048、

0.412 6 mg/mL的对照品贮备液,分别精密吸取白花前胡甲素对照品贮备液0.2 mL、白花前胡乙素对照品贮备液 0.25 mL置于 10 mL量瓶中,制得混合对照品溶液(白花前胡甲素 40.96 —g/mL、白花前胡乙素

0.315 —g/mL)。

2.2 供试品溶液的制备取本品装量差异下的大蜜丸,剪碎,混匀,取

4.0 g,加入硅藻土 12.0 g,研匀,粉碎成粗粉,取

3.5 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入50 mL醇,密塞,称定质量,超声处理(功率300 W,频率 25 kHz)40 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,精密量取续滤液 5 mL,

加在中性氧化铝柱(100~200 目,5g,内径为 1 cm)上,用正己烷30 mL洗脱,收集流出液及洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解,并转移至5 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.3 阴性对照溶液的制备按处方配比,制备不含前胡的阴性样品,按

2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

3 线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液0.5、1、2、3、4、—L注入液相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件测定,以对照品浓度(ng)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程。白花前胡甲素:Y=

6.200 2X-4.9(r=0.999 7);白花前胡乙素:Y=

4.716X-1.16(r=1.000 0)。白花前胡甲素和白花前胡乙素分别在 20.48~204.8 ng 和 5.158~51.58 ng 范围内呈良好的线性关系。

4 精密度试验精密吸取混合对照品溶液,连续进样6次,每次

—L,按“2.1”项下色谱条件测定其峰面积,结果白花前胡甲素、白花前胡乙素 RSD 分别为 0.22%、

20%,表明仪器精密度良好。

5 重复性试验

取同一批号(161102)样品,按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液6 份,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积,计算白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量,结果二者的平均含量分别为 0.232、

0.063 mg/g,RSD 分别为 0.25%、0.67%。表明本方法重复性良好。

2.6稳定性试验取同一供试品溶液,分别于0、2、4、8、12、24 h

按“2.1”项下色谱条件测定,记录峰面积,结果白花前胡甲素、白花前胡乙素的 RSD 分别为 0.40%、

0.70%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。

2.7 加样回收率试验

取同一批号(161102)样品 6份,每份 6.75 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,分别精密加入白花前胡甲素对照品贮备液0.6 mL、白花前胡乙素对照品贮备液 0.7 mL,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,

按“2.1”项下色谱条件测定,记录峰面积,计算回收率,结果见表1、表 2。 取样量 样品中含量 平均回收率

2.8样品含量测定

取不同批号的3批样品,每批3 份,按“2.2.2”

项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件测定,记录峰面积,计算含量,结果见表3。 批号 加入量测得量回收率 白花前胡乙素

本试验考察了超声、回流和索氏提取3种提取方式,结果超声45 min、回流 2h和索氏提取3h 的提取效率无明显差异,由于超声简便、易操作,故选择

超声提取。同时,对超声提取时间(30、45、60 min)

和提取溶剂用量(25、50、100 mL)进行了考察,结果显示,加入甲醇50 mL、超声提取 45 min 可将样品中白花前胡甲素和白花前胡乙素提取完全。

本试验采用中性氧化铝柱净化,考察了洗脱溶剂的种类(甲醇、乙酸乙酯、正己烷)和用量,结果采用甲醇、乙酸乙酯、正己烷除杂待测成分均能洗脱完全,但2 min之前的杂质峰响应依次降低,杂质峰降低对基线的影响较小,定量更准确,因此选择正己烷

30 mL洗脱。本试验采用二极管阵列检测器在200~400 nm波长范围内对白花前胡甲素和白花前胡乙素进行扫描,结果显示,二者在 254、321 nm 均有最大吸收,254 nm处基线噪音较大,干扰待测成分的检测,而 321 nm处基线平稳,灵敏度高,故选择321 nm为检测波长。

《中华人民共和国药典》曾将前胡和紫花前胡均

收载为前胡使用,2005年版前胡项下删掉了紫花前胡

的植物来源,2010年版起将二者分别收载,紫花前胡的指标成分为紫花前胡苷,应避免与前胡混用。本研究建立了前胡特征成分的检测方法,能有效控制通宣理肺丸制剂中前胡的质量。

参考文献:

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(收稿日期:2017-12-10)

(修回日期:2018-01-16;编辑:陈静)

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