中心组合设计-响应面法优化复方当归补血汤提取工艺

CJI (Traditional Chinese Medicine) - - 中国中医药信息杂志 -

马肖1,金永新1,陈煜娟1,要林青1,张瑞堂1,夏鹏飞2,张红梅 1

1.甘肃省第二人民医院,甘肃 兰州 730000;2.甘肃中医药大学,甘肃 兰州 730000

摘要:目的 优化复方当归补血汤的提取工艺。方法 在单因素试验、析因设计、最速上升试验的基础上,以浸膏得率及阿魏酸、芍药苷、藁本内酯提取率的权重和为响应值,采用中心组合设计-响应面法优化复方当归补血汤的提取工艺。结果 最佳条件为超声提取60 min,提取溶剂为36%乙醇,料液比为1∶94。结论 该方法提取效率较高,操作简便,预测性良好。关键词:复方当归补血汤;析因设计;中心复合设计-响应面法;提取工艺

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2018.09.016

中图分类号:R283.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2018)09-0066-05

Optimization of Extraction Technology of Compound Danggui Buxue Decoction by Central Composite Design-Response Surface Method

MA Xiao1, JIN Yong-xin1, CHEN Yu-juan1, YAO Lin-qing1, ZHANG Rui-tang1, XIA Peng-fei2, ZHANG Hong-mei1

1. Second People’s Hospital of Gansu Province, Lanzhou 730000, China;

2. Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China

Abstract: Objective To optimize extraction technology of Compound Danggui Buxue Decoction. Methods On the basis of single factor test, factorial design, and fastest rise test, yield and weight sum of extraction efficiency of ferulic acid, paeoniflorin and ligustilide were set as response, and central composite design-response surface method was used to optimize the extraction technology of Danggui Buxue Decoction. Results The optimum conditions consisted of ultrasonic-wave extraction for 60 min, ethyl alcohol concentration 36% and the ratio of material to solvent = 1:94. Conclusion This method has high extraction efficiency, easy operation and good predictability. Keywords: Compound Danggui Buxue Decoction; factorial design; central composite design-response surface method; extraction technology

当归补血汤出自李东垣《内外伤辨惑论》,由黄芪、当归按 5∶1 比例组成,具有补气生血功效。方中黄芪为君药,大补脾肺之气,以资生血之源,配以当归益血和营,两药相伍,阳生阴长,气旺血生,主治劳倦内伤、气弱血虚、阳浮外越,妇人经行、产后血虚发热头痛,以及疮痍溃后久不愈合等。在临床中,将中药复方随症加减,可加强、削弱或改变原方的作用,以适应不同病情的需要[1-4]。甘肃省第二人民医院中医科吴华主任医师根据多年临床经验,将当归补血汤与桃红四物汤合方加减,组成复方当归补血汤,在益气生血基础上兼能行血通瘀,因其良好的效果而在临床得到广泛使用。现拟将复方当归补血汤开发成

基金项目:西北民族大学科研项目(31920160115);甘肃中医

学院中青年科研基金(ZQ2014-2);甘肃省中药药理与毒理学

重点实验室自主基金项目(ZDSYS-KJ-2016-008)

通讯作者:张红梅,E-mail:404473408@qq.com

为院内制剂,优化提取方法对该方的开发利用具有重要意义。当归、桃仁及川芎在复方当归补血汤中剂量较大,且对全方功效起主导作用。因此,本试验选择

当归、川芎共有的有效成分阿魏酸、藁本内酯[5],以

及白芍的质量控制指标芍药苷,作为优化考察指标[6],以其提取率与全方药物浸膏得率的权重和为评价指标,采用基于单因素试验、析因设计试验及最速上升试验的中心组合设计-响应面法,对复方当归补血汤的提取工艺进行优化,为该方的深度开发及综合利用奠定基础。

1 仪器与试药

美国 Agilent 1100 LC/DAD 系统,Thermo ODS HYPERSIL C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 µm),

KH-500DE数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有

限公司),BT125D电子天平(赛多利斯科学仪器北京

有限公司),HH-S28s 数显恒温水浴锅(金坛市大地自动化仪器厂)。

阿魏酸对照品(批号 0829-9702)、芍药苷对照品(批号 0829-9702),中国食品药品检定研究院;藁本内酯对照品(批号 CHB160428,纯度 95%),成都曼思特股份有限公司。黄芪(批号 20170210)、白芍(批号 20170510)、熟地黄(批号 20170703),甘肃·陇西百宝药业有限责任公司;当归(批号 20171201)、桃仁(批号 20160901),河北祁新中药颗粒饮片有限公司;红花(批号 17103004),甘肃省国草药业有限公司;川芎(批号170801),成都济宏药业有限公司。水为超纯水,其他试剂均为分析纯。2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备精密称取复方药物,精密加入一定体积分数的乙醇溶液,超声提取(频率40 kHz,功率 80%)60 min,放至室温,补足质量,抽滤,取续滤液,即得。

2.2 浸膏得率的测定

按“2.1”项下方法,精密量取续滤液,置于已干

燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,105 ℃干燥 3 h,干燥器中放置1h冷却至室温,精密称定质量,计算浸膏得率。

2.3 阿魏酸、藁本内酯和芍药苷含量测定采用内标校正法同步测定阿魏酸和藁本内酯的含量,以阿魏酸为内标物,通过相对校正因子(f=

0.223 1)计算藁本内酯的含量,此方法准确、有效,

并且能降低检测成本和时间[7]。采用外标法测定芍药苷的含量。

2.3.1 色谱条件

Thermo ODS HYPERSIL C18 色谱柱(250 mm×

4. 6 mm,5 µm);流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶

液(B),梯度洗脱(0~5 min,5%~10%B;5~15 min,

10%~15%B;15~20 min,15%B;20~30 min,15%~

25%B;30~50 min,25%~60%B);流速 1.0 mL/min;柱温 25 ℃;阿魏酸检测波长为323 nm,芍药苷检测波长为 230 nm,进样量 10 µL。在上述色谱条件下,供试品溶液中各组分分离度良好,色谱图见图1。

2.3.2 对照品溶液的制备分别精密称取对照品阿魏酸、芍药苷及藁本内酯

0.596、2.276、3.24 mg,分别置于 10 mL量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,得到浓度分别为 0.059 6、

0.227 6、0.324 mg/mL的阿魏酸、芍药苷及藁本内酯对照品溶液,置于4 ℃冰箱保存,备用。分别精密吸取上述对照品溶液2 mL定容于同一5 mL容量瓶中,

得混合对照品溶液。按“2.3.1”项下色谱条件进行分析,混合对照品溶液色谱图见图2。

注:1.阿魏酸;2.芍药苷;3.藁本内酯图 2混合对照品溶液HPLC 图

2.3.3线性关系考察精密吸取上述阿魏酸对照品溶液 0.2、0.4、0.6、

0.8、1.0 mL分别定容至5 mL容量瓶,精密吸取上述芍药苷对照品溶液 0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL分别定容至5 mL容量瓶,进样10 µL,每个浓度平行进样3次,取峰面积平均值,以浓度(mg/mL)为横坐标,平均峰面积积分值为纵坐标,进行回归处理,回归方程及线性范围见表1。

液,每个浓度连续进样3针,计算峰面积的RSD,结果阿魏酸峰面积RSD=2.23%,芍药苷峰面积 RSD=

1.56%,表明仪器的精密度良好。

2.3.5 重复性试验精密称取复方药物6 份,按“2.1”项下方法制备供试品溶液,计算浸膏得率,阿魏酸、芍药苷提取率

及其权重和。权重和=阿魏酸提取率×25%+芍药苷

提取率×25%+藁本内酯提取率×25%+浸膏得率×

25%。结果 RSD=1.83%,表明该方法重复性良好。

2.3.6 稳定性试验取同一供试品溶液,分别放置 0、3、6、12、24 h后进样分析,每次进样10 µL,记录峰面积,结果阿魏酸、芍药苷峰面积的RSD 分别为 0.538%、1.428%,表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.7 加样回收率试验精密称取复方药物9份,随机分为3组,每组分

别精密加入低、中、高浓度的对照品溶液,按“2.1”

项下方法制备供试品溶液,按“2.3”项下方法测定阿魏酸、芍药苷及藁本内酯的含量,计算加样回收率。结果阿魏酸平均回收率为 100.06%,RSD=1.986 7%;芍药苷平均回收率为 99.75%,RSD=1.586 7%。

2.4 提取工艺优化

2.4.1 单因素试验固定料液比、提取时间及提取溶剂,对比超声波提取法及回流提取法对复方当归补血汤的提取效率。结果发现回流提取法的提取效率略高于超声提取法,但超声提取法操作简便,效率较高,因此选择超声提取法。在此基础上,对提取溶剂、料液比及提取时间进行考察。结果见图3。

根据单因素试验结果,选择乙醇浓度30%~70%、料液比 1∶50~1∶100、提取时间 30~60 min 为考察区间,进一步采用析因设计对上述因素进行分析。

2.4.2 二级全析因设计析因设计可以有效控制或消除其他混杂因素对反应变量的干扰,分析更准确,能同时研究几个因素之间的交互作用,使分析结果更可靠和稳定,为选择

最优处理组合提供依据[8]。因此,本试验以权重和为考察指标,筛选对复方药物提取率有显著影响的因素,试验安排及结果见表2、表 3。

由表3可知,乙醇浓度与料液比对浸膏得率有显

著影响(P<0.05),而提取时间为非显著性影响因素

(P>0.05),故将提取时间确定为提取率最高的60 min,进一步采用最速上升试验对乙醇浓度和料液比进行优化。

2.4.3最速上升试验最速上升试验是沿着最速上升路径及响应有最大增量的方向逐步移动的方法。根据二级全析因设计结果,选择乙醇浓度(A)与料液比(B)为考察因素,以权重和为评价指标,确定两者的基本步长分别为 10%与 1∶10,试验设计见表4,试验结果见图4。可以看出,权重和的最高值在第3组,即乙醇浓度为

50%、料液比为 1∶80,故将其作为响应面试验的中心试验点。

2.4.4中心组合设计-响应面法设计及结果根据最速上升试验确定的响应面试验中心点,以权重和为评价指标进行设计,采用 Design Expert8.0软件对结果进行分析处理,因素和水平见表 5,试验设计和结果见表6。

对表6试验结果数据进行多元二次回归拟合,得回归方程 Y=0.17-7.466×10-3A+0.029B-0.033AB

(r=0.914 9,P<0.000 1)。根据确立的多项式模型,绘制乙醇浓度和料液比对权重和的二维等高线图和三维效应曲面图,并优选2个因素的最佳取值范围,结果见图5。

由图 5 可以看出,最佳提取条件为:超声提取

60 min,提取溶剂为36%乙醇,料液比为 1∶94。对优选的提取条件进行 3 次平行验证,结果权重和为

0.23,预测值为 0.239 2,RSD=2.77%,表明该模型预测性良好,提取条件重复性理想。 讨论复方当归补血汤以黄芪、当归为君药,黄芪补益元气,当归补血活血;桃仁、红花为臣药,增强活血祛瘀功效;川芎理血中之气,行血活血,为血中之气药;白芍养血柔肝、缓急止痛;熟地黄补血滋阴。全方在益气生血的基础上兼能行血通瘀,在临床应用过

程中收到良好的效果,具有开发成为医院院内制剂的良好潜力,故对其提取工艺进行优化尤为必要。

中药复方由若干药味组成,对其提取工艺优化时仅针对某一药味的单一成分进行考察,会导致有效成分的损失和提取工艺的片面性。因此,本试验选择方中主要药味的主要成分阿魏酸、芍药苷、藁本内酯及浸出物得率为考察指标,这些成分的药理活性基本代表了复方的功效,计算时取其权重和,能够较为综合反映提取工艺的优劣;本试验采用单因素试验选取各因素的水平范围,采用析因设计筛选出乙醇浓度与料液比对试验结果具有显著影响,进而采用最速上升试验找到各因素的合适取值,以此为中心组合设计-响应面法的中心试验点对乙醇浓度与料液比进行优化,得到最佳提取条件。中心组合设计-响应面法能通过非线性模型拟合来预测最佳试验条件,克服了正交设计、均匀设计等预测性较差、精确度不高的不足之处。同时,与析因设计、最速上升试验结合使用,能使工艺条件得到最大程度的优化。以此模式对中药及其复方的提取工艺进行优化,能够较为全面地筛选出最优提取工艺,提高其利用效率,为其进一步开发利用和产品研发奠定基础。

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取工艺[J].中成药,2016,38(6):1265-1268.

(收稿日期:2017-09-19)

(修回日期:2017-10-23;编辑:陈静)

王文平1,倪健 1,冷新1,杨春静1,游龙泰1,刘艺 1,塞那1,梁潇2,尹兴斌 1

1.北京中医药大学中药学院,北京 100102;2.上海弼诺医疗器械有限公司,上海 201414摘要:目的 采用多指标正交试验优选芪蛭益肺颗粒的最佳提取及醇沉工艺。方法 以黄芪中黄芪甲苷、

葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的提取率及干膏得率为指标,优选芪蛭益肺颗粒的提取

工艺;以黄芪甲苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的保留率为指标,优选最佳醇沉工艺。结果 最佳水提工艺为:加10倍量水,提取 1.5 h,共提取 3次。最佳醇沉工艺为:浓缩至相对密度 1.05~1.10(60 ℃),加乙醇至60%醇沉。结论 本试验优选的水提醇沉工艺稳定可行,可为该制剂生产提供依据。

关键词:芪蛭益肺颗粒;水提醇沉;黄芪甲苷;槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2018.09.017

中图分类号:R283.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2018)09-0071-05

Optimization of Water Extraction and Alcohol Precipitation Process of Qizhi Yifei Granules by Multi-Index Orthogonal Experimental

WANG Wen-ping1, NI Jian1, LENG Xin1, YANG Chun-jing1, YOU Long-tai1,

LIU Yi1, SAI Na1, LIANG Xiao2, YIN Xing-bin1

1. College of Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China;

2. Shanghai Binuo Medical Instrument Co.,Ltd., Shanghai 201414, China

Abstract: Objective To optimize the extraction and alcohol precipitation process of Qizhi Yifei Granules by multi index orthogonal experiment. Methods With extraction rate of astragaloside in Astragali Radix,

quercetin-3-O-β-D-glucose-7-O-β-D-gentian diglucoside in Descurainiae Semen Lepidii Semen and yield rate of dry extract as indexes, the extraction process of Qizhi Yifei Granules was optimized. Taking the retention rate of astragaloside and quercetin-3-O-β-D-glucose-7-O-β-D-gentian diglucoside as indexes, the alcohol precipitation process was optimized. Results The best water extraction process was as follows: adding 10 times amount of water, extracting for 1.5 h, 3 times. The optimum alcohol precipitation process was: concentrated to the relative density of

1.05–1.10 (60 ℃), adding ethanol to 60% and alcohol precipitation. Conclusion The optimized extraction and alcohol precipitation process is stable and feasible, which can provide the basis for the preparation.

Keywords: Qizhi Yifei Granules; water extraction and alcohol precipitation; astragaloside; quercetin-3-O-β-Dglucose-7-O-β-D-gentian diglucoside

芪蛭益肺颗粒为北京中医药大学东直门医院治疗慢性阻塞性肺疾病的经验方,由黄芪、制水蛭、酒黄精、清半夏、浙贝母等 10 味药组成,具有补气润肺、消肿散结、化痰止咳平喘功效,经临床应用多年,疗效显著。本方重用黄芪补气升阳、行滞通痹,酒黄精补气养阴、健脾、润肺,葶苈子泻肺平喘、利水消肿。原方为汤剂,由于颗粒剂具有性质稳定、生物利用度高、便于工业化生产和携带、服用方便的优点,遂将其开发成颗粒剂。结合文献研究[1-10],确定制剂

基金项目:北京市科技计划“十病十药”研发(Z020071620099)

通讯作者:尹兴斌,E-mail:yxbtcm@163.com

工艺为:3 味药提取挥发油,其余 7 味药水提,2 份滤液合并后醇沉。

本研究以黄芪中黄芪甲苷和葶苈子中槲皮素-3O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷及出膏率为指标,采用正交试验法优化芪蛭益肺颗粒处方提取工艺及醇沉工艺,确定芪蛭益肺颗粒在生产中的工艺参数,为制剂生产提供支撑性数据。

1 仪器与试药

Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),安捷伦1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司), 2000ES 蒸发光散射检测器(奥泰公司),HH-S4型电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司),

KQ5200DA 数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),ZDHM型调温电热套(北京中兴伟业仪器

有限公司),BT125D 型电子分析天平(赛多利斯,

0.01 mg),JY5002 电子天平(上海衡平仪器仪表厂,

0.1 mg)。

黄芪甲苷对照品(批号 110781-201515)、槲皮素

3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品(批号

111854-201203),中国食品药品检定研究院;黄芪(批

20160621,北京本草芳源药业有限公司)、制水[批号 601102409,北京同仁堂(亳州)饮片有限责公司]、酒黄精(批号 20160518,北京本草芳源药有限公司)、清半夏(批号 20160328,北京本草芳源药业有限公司)、浙贝母(批号 20160512,北京本草芳源药业有限公司)、葶苈子(批号 20160325,北京本草芳源药业有限公司)、前胡(批号 20160510,北京本草芳源药业有限公司),经北京中医药大学刘春生教授鉴定,均符合 2015 年版《中华人民共和国药典》规定。乙腈、甲醇为色谱纯(Fisher公司),水为娃哈哈纯净水,其余试剂均为分析纯。2 方法与结果

2.1 黄芪甲苷含量测定

2.1.1 色谱条件

采用 Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱(4.6 mm×

250 mm,5 μm),乙腈-水(30∶70)为流动相,流速

1.0 mL/min,柱温 25 ℃。蒸发光散射检测器(ELSD)参数:漂移管温度 100 ℃,载气(压缩空气)流速

2.7 L/min,进样量 10 μL。色谱图见图1。黄芪甲苷峰的保留时间为 16.275 min,分离度>1.5,表明此方法可行。

2.1.2 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成浓度为 0.502 mg/mL 的溶液,即得。

2.1.3 供试品溶液的制备按处方称取饮片9份,各 64 g,按 L9(34)正交试验安排进行提取,滤液过滤,浓缩定容至1000 mL容量瓶内,摇匀后用250 mL容量瓶精密量取250 mL药液,离心除去不溶于水的杂质,将离心后的上清液浓缩至 25 mL,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取4 次,每次 40 mL,萃取液用氨试液萃取2次,每次 50 mL,弃去氨试液,蒸干,用甲醇复溶,定容至 5 mL 容量瓶中,测定黄芪甲苷含量[11]。

2.1.4 阴性对照溶液的制备按处方比例称取除黄芪外的其他药物饮片,按

“2.1.3”项下方法制备,即得。

2.2 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含

量测定

2.2.1 色谱条件

采用 Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱(4.6 mm×

250 mm,5 μm),乙腈-0.1%醋酸溶液(11∶89)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30 ℃,进样量 25 μL。色谱图见图 2。槲皮素-3-O-β-D-葡萄

糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷峰的保留时间为 5.6 min,分

离度>2.5,表明此方法可行。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品适量,加30%甲醇制成浓度为0.020 1 mg/mL的溶液,即得。

2.2.3 供试品溶液的制备按处方称取饮片9份,各 64 g,按 L9(34)正交试验安排进行提取,滤液过滤,浓缩定容至1000 mL容量瓶内,摇匀后取1 mL,过微孔滤膜,取续滤液,

测定提取液中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的提取率。

2.2.4 阴性对照溶液的制备按处方比例称取除葶苈子外的其他药物饮片,按

“2.2.3”项下方法制备,即得。

2.3水提工艺优选

2.3.1正交试验设计

通过查阅文献及对本研究目的的考虑[12-14],选择加水倍量、提取时间、提取次数三因素,考察加水8、

10、12 倍量,提取 1、1.5、2 h,提取 1、2、3 次对提取结果影响,采用L9(34)正交表,以黄芪甲苷提

取率、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷提取率、干膏得率为考察指标,优选最佳水提工艺,因素水平见表1。

2.3.2 正交试验方法与结果按处方称取饮片9份,各 64 g,按正交试验安排进行提取,取正交试验的9份供试品溶液,分别定容至 1000 mL 容量瓶中,按“2.1.3”“2.2.3”项下方法制

备供试品溶液,测定黄芪甲苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄

糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷提取率。另取正交试验的 9份供试品溶液,各精密量取250 mL,置于干燥至恒重的蒸发皿中,蒸干,计算干膏得率。结果见表 2,方差分析见表3~表 5。

考虑到加权平均法对于各因素判定的主观

性[15-16],本研究采用综合分析各因素优选最佳工艺的方法。综合方差分析结果显示,C因素(提取次数)

对槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的提

取率及干膏得率有显著影响(P<0.05),且通过比较

2个指标的K值发现,两因素均K3>K2>K1,故提取次数确定为3 次;A因素和B因素对3个指标均无显著影响,通过 K 值比较,对于黄芪甲苷提取率为

A3B2C3,对于槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷提取率为 A2B2C3,对于干膏得率为 A3B3C3,综合考虑生产中的时间成本、资金成本,以及各指标K值,最终确定提取工艺为A2B2C3,即加 10 倍量水,提取 1.5 h,提取 3 次。

2.3.5 水提工艺验证试验为进一步考察最佳工艺的准确性和稳定性,按已确定的最优工艺进行3批平行验证试验,结果见表6,表明正交试验确定的最优工艺方案准确、稳定可行。

2.4醇沉工艺优选

2.4.1醇沉相对密度考察影响醇沉的主要因素有药液浓缩相对密度、醇沉

浓度[17-20]。预试验显示,用 60%乙醇所得指标成分保留率最高。醇沉工艺试验设计如下:称取处方中水提部分黄芪、酒黄精、制水蛭、清半夏、浙贝母、葶苈子、前胡 7 味药各 6 个处方量饮片,加 10 倍量水,加热回流提取3次,每次 1.5 h,趁热过滤,合并提取液,冷却备用;称取6个处方量化橘红、当归、连翘

3 味药,水蒸汽蒸馏法提取挥发油,水液过滤,另器收集,合并上述2份滤液。平行量取滤液4份,每份

1700 mL,其中 1份作为空白溶液,另3份分别浓缩至相对密度为 1.05~1.10、1.10~1.15、1.15~1.20

(60 ℃),加入95%乙醇,调节乙醇浓度至60%。冷藏静置 24 h 后,将沉淀离心,量取上清液体积,取

1/10,用旋转蒸发仪蒸干,加水复溶,定容至 100 mL 容量瓶中,取 1 mL,测定其中槲皮素-3-O-β-D-葡萄

糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的含量。精密量取 1/4 醇沉上清液,用旋转蒸发仪蒸干,用25 mL水复溶后测量黄芪甲苷的含量。结果见表 7。可见,浓缩至相对密度为 1.05~1.10 时,指标成分黄芪甲苷和槲皮素-3-O-βD-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷的保留率均最高,故确定醇沉时浓缩液的相对密度为 1.05~1.10。

2.4.2醇沉浓度考察平行量取上述滤液4份,每份 1700 mL,其中 1份作为空白溶液,均浓缩至相对密度 1.05~1.10,分别用 60%、70%、80%乙醇醇沉,结果见表 8。可见,

60%乙醇醇沉槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆

双糖苷的保留率最高,70%乙醇醇沉黄芪甲苷的保留

率最高,60%醇沉和70%醇沉的黄芪甲苷保留率无明

显差异,另结合大生产及文献研究[21-25],选择醇沉浓度为 60%。

2.4.3醇沉工艺验证试验称取处方量药材,按照优选的水提醇沉工艺进行

3批验证试验,结果见表9。结果显示,3批验证试验数据稳定,确定醇沉工艺为浓缩至相对密度 1.05~

1.10,60%乙醇。

本研究以黄芪甲苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7O-β-D-龙胆双糖苷的提取率及干膏得率为指标,采用正交试验设计优化芪蛭益肺颗粒的提取工艺,最终确定最优提取工艺为加10倍量水,提取 1.5 h,共提取

3 次。3 批验证试验显示提取工艺准确,稳定可行。

另外,以黄芪甲苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D龙胆双糖苷的保留率为指标,最终确定芪蛭益肺颗粒的最优醇沉工艺为浓缩至相对密度为 1.05~1.10,用

60%乙醇醇沉。3批验证试验显示醇沉工艺稳定可行。本处方药味众多,若以单一成分作为评价指标,不能保证颗粒整体质量,故本试验选取3个指标优选提取工艺,以确保提取工艺的准确性和可靠性,考虑到加权评分的主观性,未采用加权评分法,而是根据每个指标的正交试验结果进行综合分析,确定最佳提取工艺。本研究数据可用于指导制剂生产。

2015年版《中华人民共和国药典》规定,葶苈子含量测定的指标成分为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖 -7O-β-D-龙胆双糖苷,而文献报道以此成分作为正交试验指标的研究很少,本研究可为葶苈子在生产中的提取及醇沉工艺提供参考依据。

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(收稿日期:2017-12-06)

(修回日期:2017-12-26;编辑:陈静)

图 5乙醇浓度和料液比对权重和的等高线图和响应面图

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