复方蛹虫草粉抗肿瘤活性的研究

摘要：本研究采用复方蛹虫草粉水提取物，研究其对肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7和慢性髓原白血病细胞K562的抑制作用。复方蛹虫草粉水提取物对受试细胞处理24、48h后，采用CCK-8显色法测定对肿瘤细胞的抑制率，并通过荧光显微镜观察细胞的形态变化。结果表明，复方蛹虫草粉水提取物对A549、MCF-7和K562细胞均有较强的抑制效果，处理48 h时效果最好，对A549、MCF-7、K562的抑制率分别达到了48.6%、13.4%和80.5%。细胞形态上表现为细胞膜均遭到破坏，内容物泄露。

关键词：复方蛹虫草粉；抗肿瘤；细胞增殖

引言

蛹虫草又称北冬虫夏草，国家卫生健康委已经将蛹虫草加入药食两用的中药名单，具有很高的药用价值。蛹虫草中生物活性物质主要有虫草素、虫草多糖、虫草多肽等，具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎症、免疫调节等生理活性，已经逐渐应用到保健、医药等领域。虫草多糖能够诱导T-淋巴细胞增殖，增强IL-2、IL-6的分泌，同时还可以增强巨噬细胞的吞噬作用。另有研究证实，虫草素能够抑制肺癌细胞A549和肺癌细胞H358的生长，且抑制作用呈剂量依赖性。

目前已有一些虫草制品、富硒制品被证实具有抗肿瘤的功效，但其疗效尚有待进一步提高。为了更好地开发利用蛹虫草、松花粉、硒、裸藻等天然资源，本研究选用按照特定比例进行复配的复方蛹虫草粉，将其水提取物分别作用于人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF- 7和人慢性髓原白血病细胞K562，研究其对如上三种肿瘤细胞生长的影响，并对其细胞形态进行观察，为复方蛹虫草粉类产品的资源开发提供一定的理论依据。

1材料与方法

1.1 主要材料与仪器

MCF-7

A549

K562均购自南京科佰生物科技有限公司。复方蛹虫草粉由国珍健康科技（北京）有限公司提供。DMEM无血清细胞培养基购自Gibco公司；胎牛血清（ Fetal Bovine Serum，FBS）、100×青链霉素混合液均购自Hyclone公司；胰蛋白酶购自Roche公司； DMSO购自Solarbio公司； CCK-8购自Donjindo公

PBS（磷酸盐缓冲液）购自BBI life science公司；二氧化碳培养箱购自Panasonic公司；倒置光学显微镜、荧光显微镜均购自日本尼康公司；台式冷冻离心机购自HITACHI公司； Stat Fax- 2100型酶联免疫检测仪购自BIO- RAD公司； T25细胞培养瓶购自Fisher公司； HH- 4型数显恒温水浴锅购自Thermo公司； YDS- 20型液氮生物容器购自成都金凤液氮容器有限公司；超净工作台（ SW-CJ-2D型）购自NUAIRE公司。

1.2复方蛹虫草粉水提取物的制备

称取复方蛹虫草粉0.5g，用50mL 60℃热水浸提1.5h，重复两次，合并提取液， 0.45μm滤膜过滤，低温浓缩至无水状态，加入1mL去离子水复溶，真空干燥，称重，配制提取物浓度为2mg/ mL的溶液，再用0.22μm滤膜过滤。取1mL提取物，加入9mL培养液，得终浓度为200μg/mL。

1.3肿瘤细胞抑制实验测定

选取对数生长期的A549 MCF-7

和K562细胞，以1×105个/mL接种于96孔板中，每孔100μL。待细胞培养12h后，加入复方蛹虫草粉水提取物，每孔100μL，每个样品设置6个平行，对照组加入等体积含胎牛血清的DMEM培养液，置于37℃，5%CO2及饱和湿度的培养箱中孵育24h、48h。培养结束后，小心吸出原培养液，每孔加入10μL CCK- 8溶液，孵育1- 4h后使用酶标仪测定450 nm波长下的吸光值。按如下公式计算提取物对细胞的抑制率：

抑制率（ %）=（实验组OD值-阴性组OD值） /（阴性组OD值-空白组OD值）×100%

1.4肿瘤细胞形态观察

选取对数生长期的A549、MCF-7和K562细胞，以1×105个/ mL接种于12孔板中，每孔1mL。待细胞培养12h后，加入复方蛹虫草粉水提取物，每孔1mL，对照组加入等体积的培养液，置于37℃，5%CO2及饱和湿度的培养箱中孵育48h。培养结束后，小心吸出原培养液，用PBS轻轻的冲洗细胞2次后，加入一定体积的台盼蓝染色后荧光显微镜观察。对于K562悬浮细胞，直接吸取一定体积的培养液， 1000rpm，离心5分钟，用PBS冲洗一次，离心后加入一定体积的培养基轻轻吹打混匀，加入等体积的台盼蓝进行染色，荧光显微镜观察。

1.5数据分析

数据采用Spss 24.0

2. 结果

2.1复方蛹虫草粉水提取物对人肺癌细胞A549生长的影响